Resiliência ao envelhecimento através da otimização e regulação da microbiota (ARMOR)

A perda muscular esquelética na velhice é um ponto crítico para o desenvolvimento de condições de saúde muito graves que afetam a qualidade de vida dos idosos, como perda de autonomia, perda de cognição saudável e desenvolvimento de doenças metabólicas complexas. Além disso, a microbiota intestinal pode ser modulada através do transplante de microbiota fecal (FMT), e possivelmente esta modulação poderia ter efeitos diretos que promovem a saúde muscular. Portanto, este projeto tem como objetivo investigar se a modificação da microbiota intestinal em idosos através do TMF utilizando doadores jovens e treinados pode melhorar a saúde e a função do músculo esquelético, levando a uma maior resiliência, reduzindo o declínio cognitivo e a disfunção metabólica associada ao envelhecimento, especialmente em contextos estressantes. .

Os doadores seriam indivíduos jovens e treinados. Por que doadores treinados? Há evidências crescentes de que a composição da microbiota intestinal é regulada pelo exercício físico. Em estudos com animais, foi demonstrado que o exercício crónico aumenta a biodiversidade da microbiota intestinal e reduz a inflamação sistémica e intestinal. O perfil bacteriano associado ao exercício é específico, por exemplo, não corresponde ao associado a uma alimentação saudável, sugerindo que a actividade física permite o desenvolvimento de um perfil microbiano específico nas comunidades bacterianas intestinais. Vários estudos observaram que alterações na microbiota intestinal associadas ao exercício são benéficas para promover a integridade da mucosa intestinal e a função metabólica geral do indivíduo.

Em humanos, observou-se que a biodiversidade bacteriana intestinal é maior em atletas em comparação com indivíduos sedentários (normalizada pelo peso corporal, idade e sexo). Na verdade, há evidências de que uma rotina crônica de exercícios pode restaurar a microbiota intestinal para um perfil saudável em indivíduos com disbiose intestinal. Em ratos e camundongos, o exercício crônico aumenta a biodiversidade de Firmicutes, Bifidobacteria e Actinobacteria e reduz a proporção de Bacteroides. Alguns dados mostram como a presença da microbiota intestinal afeta o desempenho muscular, por exemplo, descobriu-se que ratos livres de germes tinham maior resistência à natação em comparação com ratos livres de germes, e quando estes últimos foram colonizados por bactérias no intestino, os ratos aumentaram sua resistência física e nadaram por mais tempo.

O principal objetivo deste projeto é realizar transplantes de microbiota fecal (FMT) de jovens doadores fisicamente ativos para uma coorte de indivíduos mais velhos para avaliar seu efeito na função muscular, cognitiva e metabólica. O FMT em idosos está planejado para ser realizado por meio da administração de cápsulas liofilizadas de microbiota. Ao restaurar a diversidade microbiana, espera-se melhorar a qualidade e a função dos músculos esqueléticos, levando a uma maior resiliência cognitiva e metabólica. É importante mencionar que modificações da microbiota intestinal têm sido associadas a efeitos diretos e específicos nas funções cerebrais e metabólicas, pelo que o TMF de doadores jovens e treinados proposto neste projeto poderia ter. Este projeto tem grande potencial para desenvolver uma abordagem inovadora para o tratamento de doenças altamente debilitantes que afetam os idosos, baseada na liofilização e encapsulamento da microbiota intestinal de doadores jovens e treinados, que pode ser facilmente preservada num congelador convencional. Esta abordagem foi implementada anteriormente para o tratamento da infecção por C. difficile, com excelentes resultados. Esta ideia terá um impacto profundo na qualidade de vida dos pacientes adultos e idosos, pois pode ser uma opção alternativa ou complementar à terapia de exercício físico a que os idosos devem ser submetidos para prevenir ou tratar a sarcopenia, mas que muitas vezes não pode ser alcançada adequadamente devido a limitações físicas associadas à velhice. Devido à elevada percentagem de idosos em todo o mundo e à elevada prevalência de sarcopenia entre os idosos, os investigadores pretendem abordar um problema significativo de saúde pública com uma grande população-alvo ávida por opções para promover a saúde muscular, a autonomia funcional, bem como a capacidade cognitiva e bem-estar metabólico.

PERGUNTA DE PESQUISA. A hipótese é a seguinte: O transplante de microbiota intestinal de doadores jovens e treinados promove a resiliência através do aprimoramento da função muscular, preservando assim o desempenho cognitivo e metabólico em indivíduos mais velhos expostos a situações estressantes.

OBJETIVOS GERAIS E ESPECÍFICOS. Objetivo Geral Demonstrar que o transplante de microbiota fecal de doadores jovens e fisicamente treinados promove o desempenho muscular, prevenindo o declínio cognitivo e metabólico em indivíduos idosos em contexto estressante.

Objetivos Específicos Avaliar o efeito do transplante de microbiota fecal (TMF) de doadores jovens treinados na saúde muscular de idosos, correlacionando os resultados com o grau de exposição ao estresse dos idosos receptores de TMF.

Avaliar o efeito do transplante de microbiota fecal (TMF) de doadores jovens treinados sobre os parâmetros cognitivos de receptores idosos, correlacionando os resultados com os níveis de estresse dos indivíduos e as modificações da função muscular após o TMF.

Avaliar o efeito do transplante de microbiota fecal (TMF) de doadores jovens treinados sobre os parâmetros metabólicos de receptores idosos, correlacionando os resultados com os níveis de estresse dos indivíduos e as modificações da função muscular após o TMF.

Nestes objetivos, os investigadores pretendem investigar se o TMF de doadores jovens treinados pode melhorar a função muscular em indivíduos mais velhos, com consequências benéficas nas funções cognitivas e metabólicas, correlacionando os resultados com o grau de exposição ao stress dos participantes.

PROJETO EXPERIMENTAL. A pesquisa está estruturada como um ensaio clínico randomizado, controlado por placebo e duplo-cego. Os pesquisadores trabalharão com um grupo de 92 idosos (65 a 84 anos, mulheres e homens). Todas as características mencionadas no desenho experimental, além do fato de que através de sua implementação os pesquisadores pretendem responder à questão: O tratamento (neste caso FMT) gera um benefício (neste projeto, um benefício muscular, cognitivo ou metabólico) ) no contexto de uma condição ou doença (envelhecimento e ambiente estressante)? e também para avaliar a segurança da intervenção, classificar esta pesquisa como um estudo clínico de Fase II. Os participantes serão recrutados na Clínica Universidad de los Andes ou no Instituto de Nutrição e Tecnologia de Alimentos (INTA) da Universidade do Chile, após assinatura de termo de consentimento livre e esclarecido. O FMT será administrado por meio de cápsulas de microbiota fecal liofilizada fabricadas no Centro de Pesquisa e Inovação Biomédica (CIIB) da Universidade de los Andes.

Doadores de microbiota fecal. Os doadores serão indivíduos jovens (20 a 35 anos, 2 homens e 2 mulheres), fisicamente ativos, que praticam pelo menos 150 minutos de atividade física aeróbica de alta intensidade por semana, pois esse tipo de treinamento melhora a diversidade e a produção de ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs) da microbiota intestinal humana. O Questionário Global de Atividade Física (GPAQ) e actígrafos serão usados ​​​​para medir a atividade física em doadores 2 semanas antes da doação de fezes. Para seleção de doadores, será considerado que os indivíduos atingiram um equivalente metabólico (MET) de 600 minutos ou mais por semana.

Os doadores atenderão a todos os critérios para doação de microbiota fecal (critérios já estabelecidos para tratamento de FMT em pacientes com CDAD).

Na fase inicial do processo de seleção, o histórico médico e o comportamento de risco dos potenciais doadores serão avaliados por meio de questionário especializado. O questionário será aplicado por um profissional médico. A avaliação objetiva inclui as consequências de uma resposta específica para o processo de seleção. Os temas e elementos a serem abordados neste questionário estão listados na Tabela 1.

TABELA 1. Elementos a serem avaliados durante a seleção de doadores antes da aprovação para transplante de microbiota fecal (FMT)

Doenças Infecciosas

• História ou exposição a doenças infecciosas com atividade crônica: HIV, vírus da hepatite B (HBV), vírus da hepatite C (HCV), Helicobacter pylori erradicado sem sucesso, sífilis, malária, tripanossomíase, tuberculose, doença de Chagas, estrongiloidíase.
• Qualquer infecção atualmente ativa ou relevante nos últimos 6 meses.
• Vacinação com vírus vivo atenuado nas últimas 8 semanas. País de nascimento. Comportamentos de Risco
• Uso atual ou anterior de drogas intravenosas.
• Comportamento sexual de alto risco nos últimos 6 meses.
• Viajar para países estrangeiros de alto risco nos últimos 6 meses.
• Ocupação atual num ambiente que facilita a aquisição de potenciais agentes patogénicos (por exemplo, veterinário, cuidador de animais, guarda florestal, funcionário prisional).
• Tatuagem, piercing ou acupuntura nos últimos 6 meses.
• Cirurgia de grande porte nos últimos 6 meses.
• Contato com sangue humano (por exemplo, acidente, ferimento por picada de agulha) nos últimos 6 meses.
• História do encarceramento.
• Transplante prévio de tecido/órgão.
• Transfusão de produtos sanguíneos (por exemplo, concentrado de hemácias, plasma, plaquetas, imunoglobulinas) nos últimos 6 meses de história médica.

História Médica

• Doenças crônicas.
• (Risco de) doença de Creutzfeldt-Jakob.
• Alergias ou atopia (por exemplo, alergias alimentares ou medicamentosas, asma).
• Hospitalização nos últimos 4 meses.
• Gravidez em andamento.
• Tratamentos com antibióticos, agendados ou recebidos nos últimos 3 meses.
• Medicamentos regulares ou suplementos nutricionais.
• IMC (aceito se ≥20 e ≤25 kg/m2).
• Idade (aceita se ≥18 e ≤30 anos).

Saúde Intestinal

• Cirurgia gastrointestinal prévia ou programada, exceto apendicectomia.
• Sintomas gastrointestinais nos últimos 3 meses (por exemplo, diarreia, obstipação, hematoquezia, vómitos, dor abdominal) ou pólipos adenomatosos ou lesões serrilhadas sésseis (removidas).
• Qualquer outro sinal ou sintoma clínico relevante nos últimos 3 meses (por exemplo, febre ou erupção cutânea).

Além de todos os agentes infecciosos descritos na Tabela 2, o SARS-CoV-2 também será descartado por meio de RT-PCR nas fezes. A presença de E. coli ST131 será estudada através de cultura clássica e tipagem por PCR, bem como a presença de genes de resistência a antibióticos. Caso sejam obtidos resultados positivos para esses marcadores, o indivíduo não pode ser doador. Para cada dose de FMT serão utilizados no mínimo 150 gramas de fezes, transportadas para o laboratório nas condições mais anaeróbicas possíveis (sistema GutAlive https://www.microviable.com/en/gutalive-2/) e no menor tempo possível a partir da coleta. As fezes são uma amostra complexa devido ao seu teor variável de água, e a única forma de padronizar a dose é pelo peso das fezes, pois a quantidade de pó final pode variar muito. Portanto, o número de cápsulas resultantes pode variar amplamente. Contudo, a carga microbiana será equivalente desde que a mesma ordem logarítmica seja mantida. As fezes serão liofilizadas misturando-as com leite semidesnatado sem lactose na proporção de 1:2 como crioprotetor. A mistura será homogeneizada em Stomacher (230 rpm), os resíduos sólidos serão removidos por centrifugação suave (500 rpm 5 min) e em seguida todos os microrganismos serão coletados por centrifugação (10.000 rpm 15 min). O sobrenadante será removido e o pellet será congelado a -80°C por pelo menos 1 hora, após o que será liofilizado a -50°C por 18-20 horas. O pó obtido será encapsulado em cápsulas com revestimento entérico em lotes que serão armazenados na ausência de umidade a 4°C com prazo de validade de 6 meses. Uma alíquota de todos os processos será armazenada a -80°C, e a rastreabilidade da amostra e do doador será realizada com software RedCap.

Participantes Idosos Número de participantes: 92 Etnia: população chilena. O Chile possui uma população de etnia homogênea, com ascendência indígena (40%) e europeia (60%).

Idade: 65-84 anos Sexo biológico: 46 homens e 46 mulheres

Processo de recrutamento, randomização, intervenção e acompanhamento do estudo, organizado nas seguintes etapas:

• Recrutamento: Os participantes são recrutados e passam por uma avaliação de elegibilidade. Eles são avaliados para determinar se atendem aos critérios de inclusão e não atendem aos critérios de exclusão.
• Consentimento Livre e Esclarecido: Os participantes elegíveis que atendem aos critérios do estudo fornecem seu consentimento informado para participar.
• Avaliações pré-intervenção: Antes da intervenção, os participantes são avaliados para classificá-los com base em seus níveis de estresse e ansiedade.
• Randomização: Um total de 92 participantes são randomizados em quatro grupos:

Baixo nível de estresse - grupo placebo (n=23) Baixo nível de estresse - grupo TMI (n=23) Nível de estresse médio/alto - grupo placebo (n=23) Nível de estresse médio/alto - grupo TMI (n=23)

Intervenção: Os participantes dos quatro grupos passam pela intervenção designada:

O primeiro grupo recebe um placebo com classificação de baixo nível de estresse. O segundo grupo recebe IMT (Intervenção de Interesse) com classificação de baixo nível de estresse.

O terceiro grupo recebe um placebo com classificação de nível de estresse médio/alto.

O quarto grupo recebe TMI com classificação de nível de estresse médio/alto.

Acompanhamento: Avaliações de acompanhamento são realizadas nas semanas 1, 4, 8 e 20 pós-intervenção para todos os grupos para avaliar os resultados das intervenções.

Esta pesquisa está estruturada como um ensaio clínico randomizado, controlado por placebo e duplo-cego. Esta estrutura permite ao estudo comparar os efeitos da intervenção (IMT) versus um placebo em diferentes classificações de nível de estresse.

Avaliações pré-intervenção:

A Escala de Estresse Percebido de 14 itens (PSS-14) será usada para avaliar o nível de estresse nos participantes. Os sintomas depressivos serão avaliados usando a Escala de Depressão Geriátrica (GDS) de 15 itens, que avalia sintomas de transtorno de humor comumente associados à depressão experimentada em adultos mais velhos (ambos os documentos anexados). Os sintomas de ansiedade serão medidos usando o Inventário de Ansiedade de Beck (BAI), que é projetado para obter uma medida de ansiedade que é relativamente independente da depressão (anexo). Estes instrumentos apresentam elevada fiabilidade e validade em amostras comunitárias, permitindo-nos classificar os voluntários em grupos de baixa ansiedade de stress e de média/alta ansiedade de stress.

Para favorecer o estabelecimento do novo ecossistema, a densidade da microbiota intestinal dos participantes será reduzida antes do FMT com rifaximina (um antibiótico não absorvível adequado para descontaminação intestinal) durante 3 dias, 1.200 mg/dia, administrado em 2 doses diárias. O antibiótico e seu cronograma de administração serão fornecidos aos participantes.

O FMT será realizado na Unidade de Ensaios Clínicos da Clínica Universidad de los Andes através da administração de 4 cápsulas (contendo uma preparação compacta liofilizada) preparadas a partir de aproximadamente 150 gramas de fezes. Os indivíduos controle receberão cápsulas de placebo com aparência idêntica às cápsulas contendo o material liofilizado da microbiota intestinal. Será fornecido transporte gratuito aos participantes entre suas residências e a Clínica Universidad de los Andes.

Os pesquisadores conduzirão este estudo usando apenas testes e análises não invasivos. Todas as avaliações propostas para medir as funções musculares, cognitivas e metabólicas serão realizadas antes e depois do FMT (de 1 a 20 semanas após o FMT). Essas avaliações serão realizadas no Centro de Saúde Ambulatorial do Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuária (CEDINTA). Será fornecido transporte gratuito aos participantes entre suas residências e o CEDINTA. Todos os participantes serão submetidos ao histórico médico antes e depois da intervenção para obter informações sobre estado geral de saúde, uso de medicamentos, antibióticos e suplementos dietéticos, histórico de doenças intestinais e qualquer outro distúrbio intestinal que possa alterar a microbiota intestinal.

Os pesquisadores calcularão o Índice de Fragilidade (FI) nos participantes de todos os grupos antes e depois do FMT. O FI será avaliado por meio de um método combinado de parâmetros clínicos e laboratoriais. Em primeiro lugar, os investigadores utilizarão um IF autorreferido criado com 30 variáveis ​​para avaliar o estado de saúde. As variáveis ​​compreendem diferentes tipos de problemas de saúde, incluindo doenças (n=9), sintomas (n=6), incapacidades para viver (n=6), problemas psicológicos (n=2), teste de Romberg, desempenho físico, Escala de Depressão Geriátrica ( pontuação GDS) e pontuação do Mini-Exame do Estado Mental (MEEM). Para variáveis ​​binárias, a presença de deficiência será codificada como “1”; e sua ausência como “0”. Para cada variável de três níveis, 0,5 será usado para representar um nível de resposta intermediário. Para o MEEM, será codificado como 0 se >23, 0,5 se MEEM=15-23 e 1 se MEEM≤14, enquanto o GDS será recodificado como 0 se GDS<11) e 1 se GDS≥11. Em segundo lugar, um FI de base laboratorial (FI-lab) identificará 15 parâmetros com base em 9 exames laboratoriais, além de pulso, pressão arterial sistólica e diastólica, pressão de pulso, IMC e circunferência da cintura. Uma faixa de referência normal será utilizada para comparar cada parâmetro, onde “0” indica valores dentro da faixa normal e “1” indica valores fora da faixa de referência. Finalmente, os pesquisadores combinarão os dois IFs para construir um IF de 45 itens (FI-combinado). Cada FI-combinado será definido como a pontuação de cada parâmetro de um indivíduo dividida pelo número total de parâmetros considerados, com o FI variando de um mínimo teórico de 0 (nenhum parâmetro prejudicado presente) a um máximo possível de 1,0 (todos prejudicados parâmetros presentes).

Para a avaliação da sarcopenia muscular, os pesquisadores medirão a massa magra e gorda usando absorciometria de raios X de dupla energia (DEXA) e excreção de creatinina. Um dinamômetro padrão será usado para medir a força isométrica. Adicionalmente, serão aplicados a Bateria Curta de Desempenho Físico e o teste de caminhada de 6 minutos para estimar o consumo máximo de oxigênio. A atividade física será avaliada por meio de actígrafo durante 7 dias. Os pesquisadores medirão a espessura do músculo reto femoral e o ângulo de penação muscular nas coxas dos participantes por meio de ultrassom. Como biomarcadores para sarcopenia, creatina quinase (CK), troponina T do músculo esquelético (sTnT), fator de crescimento semelhante à insulina-1 (IGF-1), proteína C reativa, vitamina D, TNF-α, IL-6, IL- 1β será medido no sangue.

Para o desempenho cognitivo, os participantes serão avaliados em um conjunto de habilidades cognitivas superiores, como atenção, funções executivas, memória de trabalho, linguagem e velocidade de processamento, entre outras, antes e depois da intervenção FMT. A Avaliação Cognitiva de Montreal (MoCA), Trail Making Test A e B, Digit Span Forward and Backward, Frontal Assessment Battery (FAB) e Verbal Fluency (FAS) serão administrados (anexos). A qualidade de vida dos participantes será avaliada por meio do questionário SF-36, um dos instrumentos mais utilizados e avaliados para Qualidade de Vida Relacionada à Saúde (QVRS).

Para a função metabólica, uma análise abrangente de marcadores metabólicos no sangue, como insulina, glicose, colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL, triglicerídeos e transaminases (ALT, AST, gGT) será realizada em jejum. Os pesquisadores estudarão a presença de doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) por meio de ultrassonografia. Além disso, as concentrações de metaloproteinases-9 e IL-6 no soro serão medidas por ELISA, uma vez que foi proposto que esses marcadores estejam correlacionados com a gravidade da DHGNA em humanos. Escores não invasivos de fibrose hepática também serão aplicados.

Com o DNA genômico bacteriano isolado das amostras fecais dos participantes, os pesquisadores estudarão o perfil da microbiota usando metagenômica shotgun ou sequenciamento do gene 16S. As amostras serão coletadas de doadores jovens e receptores mais velhos antes e depois do FMT. Usando ferramentas de bioinformática, os pesquisadores identificarão uma assinatura bacteriana em idosos que receberam FMT de jovens doadores treinados. Os investigadores determinarão se esta assinatura do microbioma se correlaciona com a resiliência muscular, cognitiva e metabólica, especialmente no grupo que sofre maior stress. Os investigadores propõem que os elementos-chave desta microbiota intestinal modificada em adultos mais velhos servirão como biomarcadores apropriados para a resiliência muscular, cognitiva e metabólica no contexto do envelhecimento.

SEGURANÇA O IMT realizado por pessoal qualificado não foi associado a quaisquer eventos adversos graves, mas podem ocorrer reações adversas leves ou comuns. Marcela et al. (2021) analisaram a presença de reações adversas ao TMI em uma revisão sistemática, avaliando 129 estudos envolvendo 4.241 pacientes. Eles descobriram que os efeitos adversos mais comuns foram diarreia transitória (10%), cólicas/desconforto abdominal transitório (7%), náuseas e vômitos (<5%) nas 24 horas pós-TMI. Febre transitória, distensão abdominal, fadiga e borborigmo também foram relatados em menos de 2% dos casos. Constipação (2%) e flatulência excessiva (3%) foram relatadas durante o acompanhamento.

Reações adversas graves, como bacteremia e morte como consequência direta do TMI, são extremamente raras (incidência <0,1%) e ocorreram apenas em pacientes com doenças que causam danos à mucosa digestiva. Essas doenças (doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, infecção por Clostridium difficile (CDI) e colite ulcerativa) são critérios de exclusão para este estudo. Outro estudo em 2022 avaliou a segurança associada ao uso de TMI em 5.344 pacientes afetados por ICD. Os investigadores descobriram que, em geral, o perfil de segurança foi favorável numa população de pacientes clinicamente complexos que geralmente apresentam resultados clínicos desfavoráveis. Entre a coorte, 194 pacientes (3,6%) apresentaram uma ou mais reações adversas graves (SARs). As SARs foram mais comuns entre pacientes com ICD grave ou com complicações graves (n = 94 [48,5%]). Entre as SARs, seis eventos (0,1%) foram possivelmente relacionados à TMI, todos em pacientes gravemente imunocomprometidos. Isto incluiu dois pacientes com febre, bem como um com dor abdominal em um paciente com ICD grave e complicado e câncer de mama. Além disso, dois pacientes desenvolveram síndrome de resposta inflamatória sistêmica – um após transplante de coração e outro após transplante de rim. Houve um caso relatado de surto de doença inflamatória intestinal (DII) em um paciente com histórico de colite ulcerosa não controlada com terapia biológica e imunomoduladores. Nenhuma das SAR notificadas estava definitivamente relacionada com o IMT. Notavelmente, não foram relatados casos de sepse ou transmissão de doenças infecciosas relacionadas à TMI, incluindo infecções por organismos multirresistentes. Este estudo não incluirá pacientes com ICD ou aqueles gravemente imunocomprometidos.

Finalmente, outra revisão sistemática e meta-análise em 2022 procurou estudos de TMI em pacientes com ICD, utilizando a taxa de SARs relacionadas ao TMI como desfecho primário. Os desfechos secundários incluíram SARs não relacionadas ao TMI e eventos adversos menores associados ao TMI. A análise combinada de 5.099 pacientes que receberam 5.551 TMI mostrou que as SAR relacionadas ao TMI se desenvolveram em menos de 1% dos pacientes. A taxa combinada de SARs não relacionadas ao IMT foi maior, atingindo 2,9%. A taxa combinada de eventos adversos menores também mostrou desconforto gastrointestinal e sistêmico autolimitado e infrequente. Esta meta-análise apoia o TMI como uma opção segura para o tratamento de ICD recorrente.

Para o TMI realizado exclusivamente na população idosa, um estudo com 31 pacientes com idade média de 77 anos com ICD relatou que 87% dos pacientes resolveram a infecção, e o evento adverso mais comum relatado em 4 (13%) dos 31 entrevistados foi o agravamento subjetivo da artrite. Outro estudo que realizou TMI em 35 pacientes idosos (idade média de 77 anos) com ICD não relatou efeitos adversos graves.

Em resumo, a experiência internacional com o uso do TMI relatada na literatura mostra a alta segurança desse procedimento. Entretanto, os seguintes riscos devem ser considerados: (1) Infecção: Embora o IMT tenha sido testado para bactérias, vírus, fungos e parasitas patogênicos, existe o risco de transmissão de organismos infecciosos conhecidos e desconhecidos contidos nas fezes do doador. Existe também um risco teórico de crescimento bacteriano excessivo no intestino delgado. Raramente, bacteremia (por exemplo, E. coli, Klebsiella), sepse e eventos fatais podem ocorrer após TMI; (2) Exacerbação da doença inflamatória intestinal (DII) em indivíduos com DII subjacente; (3) Alergia/anafilaxia a antígenos presentes nas fezes do doador; (4) Transmissão de doenças não infecciosas: Existe um risco teórico de desenvolvimento de doenças que podem estar relacionadas com a microbiota intestinal do doador. Estes incluem obesidade, síndrome metabólica, doenças cardiovasculares, condições autoimunes, distúrbios alérgicos/atópicos, distúrbios neurológicos, condições psiquiátricas e doenças malignas. Este risco é muito limitado no estudo, uma vez que os indivíduos com estas condições conhecidas são excluídos da doação de fezes de acordo com os procedimentos de triagem de doadores explicados neste protocolo.