Являются ли миомы матки протромботическими?

Миома матки (ММ) — это доброкачественная опухоль матки, также известная как лейомиома. По оценкам, им страдают до 80% женщин репродуктивного возраста. УФ чаще встречается у женщин афро-карибской национальности. НМ может протекать бессимптомно или сопровождаться целым рядом симптомов, включая меноррагию, дисменорею, снижение фертильности и симптомы сдавления.

Связь между венозной тромбоэмболической болезнью и НФ была установлена ​​в отчетах о случаях, сериях и одном популяционном исследовании. Истинная распространенность и полный масштаб проблемы неизвестны. Поскольку НФ настолько распространены, у многих женщин очевидная связь отражает наличие известных факторов риска венозной тромбоэмболии (ВТЭ), таких как тромбофилия, курение и серьезные сопутствующие заболевания, такие как рак. Также было показано, что тромбоз и УФ имеют общие факторы риска, такие как ожирение и возраст. Гормональная терапия, которая часто используется для лечения симптомов НФ, также может увеличить риск ВТЭ.

Однако в подгруппе женщин с ВТЭ и НФ невозможно выявить тромбофилию или приобретенные факторы риска ВТЭ. В большинстве описанных клинических случаев объемные опухоли вызывают внешнее сдавление сосудов таза, венозный застой и, следовательно, тромбоз. В обзоре клинических случаев, проведенном нашим центром, выявлены женщины с тромбозами и УФ, которые не вызывают локальный венозный застой и не имеют дополнительных факторов риска тромбоза. Это позволяет предположить, что могут существовать дополнительные патогенетические механизмы, лежащие в основе развития тромбоза у лиц с УФ. Второй центр также опубликовал обзор случаев, в котором аналогичным образом была выявлена ​​очевидная связь между УФ и тромбозом при отсутствии венозного застоя.

Структура и функция сгустка определяются условиями, присутствующими во время образования фибрина. Эндогенная продукция тромбина, клеточные компоненты и структура фибриногена вовлечены в изменение структуры и функции сгустка. Существует несколько вероятных механизмов, с помощью которых УФ может влиять на образование тромбина, образование и структуру сгустка, вызывая протромботическое состояние. Опухоли миомы могут секретировать трансформирующий фактор роста β3 (TGF-β3), и это, по-видимому, влияет на выработку тромбомодулина, антитромбина III и ингибитора активатора плазминогена 1, которые могут изменять гемостатическую способность крови и могут приводить к протромботическому фенотипу.

С другой стороны, миомы могут опосредовать косвенный протромботический эффект, индуцируя железодефицитную анемию. Железодефицитная анемия была связана в многочисленных тематических исследованиях и сериях с тромботическими явлениями, чаще всего с тромбозом церебральных вен, а также с легочной эмболией (ТЭЛА) и тромбозом глубоких вен (ТГВ). Железодефицитная анемия также может вызывать реактивное повышение тромбоцитоза эритропоэтина, тромбопоэтина и FVIII, что приводит к усилению образования тромбина. В предлагаемом исследовании мы исключим участников с умеренной и тяжелой анемией, чтобы определить, вызван ли какой-либо выявленный протромботический фенотип механизмом, отличным от анемии.

Протромботический фенотип может быть идентифицирован с помощью нескольких лабораторных исследований, каждое из которых оценивает качество и функцию образовавшихся тромбов. В этом исследовании мы будем проводить глобальные анализы гемостаза, такие как активированное частичное тромбопластическое время (АЧТВ) и протромбиновое время (ПВ). Однако эти тесты дают информацию о гемостатическом процессе до момента начального образования фибрина и игнорируют процедуру образования тромбина. В этом исследовании мы проведем исследования генерации тромбина, лизис плазменного сгустка и секвенирование РНК в дополнение к стандартным лабораторным тестам (АЧТВ, протромбиновое время, FVIII:C, фибриноген (с использованием методов Клаусса), количество тромбоцитов, тесты функции печени и почек).

2 МЕТОДОЛОГИЯ Исследования лизиса сгустка плазмы и образования тромбина будут проводиться в обедненной тромбоцитами плазме (БТП). Таким образом, роль, которую играют тромбоциты и фибриноген, позволит нам замораживать и хранить образцы, чтобы можно было проводить тесты в пакетном режиме после того, как все образцы будут собраны. Это позволяет проводить однородное тестирование в одних и тех же условиях.

2.1 Плазменный лизис сгустка Имеются данные о том, что образование компактных сгустков с повышенной устойчивостью к лизису предрасполагает к тромбозу. Фенотип протромботического сгустка характеризуется небольшим размером пор, низкой проницаемостью сгустка и повышенной устойчивостью к фибринолизу. Анализ образования сгустка на основе плазмы позволяет детально оценить образование фибрина и способность к разрушению. Принцип заключается в том, что цитратная бедная тромбоцитами плазма (БПП) смешивается с активатором свертывания (рекомбинантным тканевым фактором или тромбином), а также с фосфолипидами и кальцием для индукции образования фибрина. Одновременно добавляют tPa или другой активатор плазминогена, чтобы вызвать лизис сгустка. В анализе используется турбидиметрический принцип, поскольку фибриновая сеть сначала формируется, а затем лизируется в лунке, мутность увеличивается, а затем уменьшается. Поглощение регистрируют непрерывно в течение определенного периода времени (например, 1,5 ч), в результате чего формируется кривая лизиса сгустка (рис. 1), из которой можно получить следующие параметры: время до начального образования фибрина (лаг-фаза), максимальное поглощение (пиковая концентрация фибрина в лунке), интеграл или площадь под кривой лизиса сгустка (AUC - чистое образование фибрина) и время от пика до 50% лизиса сгустка (50% время лизиса).

Протромботические лабораторные фенотипы, обнаруженные с помощью этих анализов, были связаны с неспровоцированной ВТЭ, хронической тромбоэмболической легочной гипертензией и посттромботическим синдромом. Это было связано с рецидивирующей ТЭЛА и может быть прогностическим фактором рецидивирующего ТГВ.

2.2 Генерация тромбина Генерация тромбина является признанным инструментом для оценки общей функции системы свертывания крови. Вся система свертывания участвует в образовании и последующей инактивации тромбина, и сумма этих действий приводит либо к гемостатическому, либо к протромботическому событию. Методом, выбранным для оценки образования тромбина, является калиброванная автоматическая тромбография (КАТ), которая включает использование флуоресцентного субстрата, содержащего кальций, для запуска образования тромбина, в то время как программное обеспечение постоянно отслеживает и записывает концентрацию тромбина во времени. С помощью специализированного программного обеспечения и калибратора флуоресцентный сигнал можно визуализировать в виде тромбограммы. Исходя из этого, можно рассчитать такие параметры, как время задержки, время до пикового уровня тромбина, пиковый уровень тромбина и эндогенный тромбиновый потенциал (ЭТП).

2.3 Секвенирование РНК Имеются данные in vitro и in vivo о том, что внеклеточная РНК, высвобождаемая при повреждении сосудов, способствует тромбозу за счет усиления активности протеаз, участвующих в контактной фазе коагуляции. Эта теория была дополнительно продемонстрирована Kannemeier et al. (2007), которые доказали, что введение РНКазы замедляет образование тромбов и окклюзию кровеносных сосудов. Внеклеточная РНК может быть непосредственно определена количественно с помощью метода, известного как секвенирование РНК. Компания NanoString Technologies, Inc. разработала более надежный, воспроизводимый и простой в использовании метод под названием «nCounter». По сравнению с обычным секвенированием РНК, nCounter может количественно определять меньшее количество исходной РНК (1 нг против 100 нг общей РНК). Образцы будут анализироваться в лаборатории NanoString, поскольку nCounter является собственной платформой.