Pro-trombotikusak a méhmiómák?

A méhfibroidok (UF) jóindulatú méhdaganatok, más néven leiomyomák. Becslések szerint a reproduktív korú nők 80%-át érintik. Az UF gyakrabban fordul elő afro-karibi etnikumú nőknél. Az UF tünetmentes lehet, vagy számos tünethez kapcsolódhat, beleértve a menorrhagiát, a dysmenorrhoeát, a szubfertilitást és a nyomástüneteket.

A vénás thromboemboliás betegség és az UF közötti összefüggésre következtettek esetleírások, sorozatok és egy populációalapú vizsgálat. A probléma valódi előfordulása és teljes mértéke nem ismert. Mivel az UF annyira elterjedt, sok nőben a látszólagos összefüggés a vénás thromboembolia (VTE) ismert kockázati tényezőinek jelenlétét tükrözi, mint például a thrombophilia, a dohányzás és a jelentős társbetegségek, például a rák. A trombózisnak és az UF-nek is vannak közös kockázati tényezői, mint például az elhízás és az életkor. A hormonális terápiák, amelyeket gyakran alkalmaznak az UF tüneteinek kezelésére, szintén növelhetik a VTE kockázatát.

A VTE-ben és UF-ben szenvedő nők egy részében azonban nem lehet azonosítani a thrombophiliát vagy a VTE szerzett kockázati tényezőit. A legtöbb jelentett esettanulmányban a terjedelmes daganatok a kismedencei erek külső összenyomódását, vénás pangást és ezáltal trombózist okoznak. A központunk által közölt klinikai esettanulmány olyan trombózisban és UF-ben szenvedő nőket azonosított, amelyek nem okoznak helyi vénás pangást, és nincsenek további trombózis kockázati tényezők. Ez arra utal, hogy az UF-ben szenvedő egyének trombózisának kialakulásában további patogén mechanizmusok állhatnak. Egy másik központ szintén közzétett egy esetismertetőt, amely hasonlóképpen nyilvánvaló összefüggést azonosított az UF és a trombózis között vénás pangás hiányában.

A vérrög szerkezetét és működését a fibrinképződés során fennálló körülmények határozzák meg. Az endogén trombin termelés, a sejtkomponensek és a fibrinogén szerkezete mind szerepet játszik a vérrög szerkezetének és működésének megváltoztatásában. Számos valószínű mechanizmus létezik, amelyeken keresztül az UF befolyásolhatja a trombinképződést, a vérrögképződést és a szerkezetet, hogy pro-trombotikus állapotot hozzon létre. A mióma tumorok transzformáló növekedési faktort (TGF-ß3) szekretálhatnak, és úgy tűnik, hogy ez befolyásolja a trombomodulin, az antitrombin III és a plazminogén aktivátor inhibitor 1 termelődését, amelyek mindegyike módosíthatja a vér hemosztatikus kapacitását, és pro-trombotikus fenotípust eredményezhet.

Alternatív megoldásként a miómák közvetett pro-trombotikus hatást is közvetíthetnek azáltal, hogy vashiányos anémiát váltanak ki. A vashiányos vérszegénységet számos esettanulmány és sorozat összefüggésbe hozza trombózisos eseményekkel, leggyakrabban agyi vénás trombózissal, de tüdőembóliával (PE) és mélyvénás trombózissal (DVT) is. A vashiányos vérszegénység az eritropoetin thrombocytosis, a thrombopoetin és a FVIII reaktív emelkedését is okozhatja, ami fokozott trombinképződést eredményez. A javasolt vizsgálatból kizárjuk a közepesen súlyos és súlyos vérszegénységben szenvedőket, hogy megállapíthassuk, hogy az azonosított pro-trombotikus fenotípust nem anémiától eltérő mechanizmus okozza-e.

A pro-trombotikus fenotípust számos laboratóriumi vizsgálattal lehet azonosítani, amelyek mindegyike felméri a képződött vérrögök minőségét és működését. Ebben a tanulmányban globális hemosztatikus vizsgálatokat fogunk végezni, mint például az aktivált parciális thromboplasztikus idő (APTT) és a protrombin idő (PT). Ezek a tesztek azonban információt nyújtanak a hemosztatikus folyamatról egészen a kezdeti fibrinképződésig, és figyelmen kívül hagyják a trombinképződés folyamatát. Ebben a tanulmányban a standard laboratóriumi vizsgálatokon (APTT, PT, FVIII:C, fibrinogén (Clauss módszerekkel), thrombocytaszám, máj- és vesefunkciós vizsgálatok) kívül trombingenerációs vizsgálatokat, plazma vérrög lízist és RNS szekvenálást végzünk.

2 MÓDSZER A plazma vérrög lízist és a trombin képződést thrombocytaszegény plazmában (PPP) végezzük. Ezért a vérlemezkék és a fibrinogén szerepe lehetővé teszi számunkra, hogy lefagyasztjuk és tároljuk a mintákat, hogy a vizsgálatokat szakaszosan lehessen elvégezni, miután az összes mintát összegyűjtöttük. Ez lehetővé teszi, hogy a vizsgálatokat azonos körülmények között homogén módon végezzék el.

2.1 A plazma vérrög lízise Bizonyíték van arra, hogy a tömör vérrögök kialakulása, amelyek fokozott ellenállást mutatnak a lízissel szemben, trombózisra hajlamosítanak. A pro-trombotikus vérrög fenotípust kis pórusméret, alacsony vérrög-permeabilitás és fokozott fibrinolízis-ellenállás jellemzi. A plazma alapú vérrögképződési vizsgálat lehetővé teszi a fibrinképződés és -lebontási kapacitás részletes értékelését. Az elv az, hogy a citrált, vérlemezkékben szegény plazmát (PPP) összekeverik egy koagulációs aktivátorral (rekombináns szöveti faktor vagy trombin), valamint foszfolipidekkel és kalciummal, hogy indukálják a fibrin képződését. Ezzel egyidejűleg tPa-t vagy más plazminogén aktivátort adunk a vérrög lízisének indukálására. Az assay turbidimetriás elvet alkalmaz, mivel a fibrinhálózat először kialakul, majd a kútban lizálódik, a zavarosság növekszik, majd csökken. Az abszorbanciát folyamatosan regisztrálják egy meghatározott időtartamon keresztül (pl. 1,5 óra), ami a vérrög-lízis görbe kialakulását eredményezi (1. ábra), amelyből a következő paraméterek származtathatók: a kezdeti fibrinképződésig eltelt idő (lag fázis), maximális abszorbancia (csúcs fibrinkoncentráció a lyukban), integrál vagy a vérrög-lízis görbe alatti terület (AUC - nettó fibrinképződés), és a csúcstól a vérrög 50%-os líziséig eltelt idő (50%-os lízisidő).

Az ezekkel a tesztekkel kimutatott pro-trombotikus laboratóriumi fenotípusok nem provokált VTE-vel, krónikus thromboemboliás pulmonális hipertóniával és poszttrombotikus szindrómával hozhatók összefüggésbe. Összefüggésbe hozták a visszatérő PE-vel, és előre jelezheti a visszatérő DVT-t.

2.2 Trombingenerálás A trombinképződés bevált eszköz a véralvadási rendszer általános működésének felmérésére. A teljes véralvadási rendszer részt vesz a trombin létrehozásában és ezt követő inaktiválásában, és ezeknek a hatásoknak az összessége hemosztatikus vagy pro-trombotikus eseményt eredményez. A trombinképződés értékelésére kiválasztott módszer a Calibrated Automated Thrombography (CAT), amely kalciumot tartalmazó fluoreszcens szubsztrátot használ a trombinképződés kiváltására, miközben a szoftver folyamatosan figyeli és időben rögzíti a trombinkoncentrációt. A speciális szoftver és kalibrátor segítségével a fluoreszcens jel trombogramként jeleníthető meg. Ebből olyan paraméterek számíthatók, mint a késleltetési idő, a trombin csúcsszintjéig eltelt idő, a trombin csúcsszintje és az endogén trombinpotenciál (ETP).

2.3 RNS szekvenálás In vitro és in vivo bizonyíték van arra, hogy az érsérülés hatására felszabaduló extracelluláris RNS elősegíti a trombózist azáltal, hogy fokozza a koaguláció kontaktfázisában részt vevő proteázokat. Ezt az elméletet Kannemeier et al. (2007), akik bebizonyították, hogy az RNAase adagolása késleltette a trombusképződést és az érelzáródást. Az extracelluláris RNS közvetlenül meghatározható az RNS-szekvenálás néven ismert módszerrel. A NanoString Technologies, Inc. egy robusztusabb, reprodukálhatóbb és egyszerűen használható technikát fejlesztett ki, az "nCounter" nevet. A rutin RNS-szekvenáláshoz képest az nCounter kisebb mennyiségű kiindulási RNS mennyiségi meghatározására képes (1 ng szemben a 100 ng teljes RNS-sel). A mintákat egy NanoString Laboratoryban elemzik, mivel az nCounter egy szabadalmaztatott platform.