益生菌对口腔伤口愈合的影响 - 初步研究 (PROWOUND)

干预：在知情同意和临床数据（年龄、性别）基线收集后，参与者将被随机分配到其中一个治疗顺序。 作为磨合期，他们将获得足够 7 天的益生菌或安慰剂药片。 指示参与者每天服用两片（早上一片，晚上一片，第 0-7 天），并要求他们避免食用任何其他含有益生菌的食物或补充剂。 第八天，参与者将前往诊所并进行穿刺活检。 根据分配组，将提供益生菌或安慰剂油。 将指示参与者每天晚上用塑料微刷将油局部涂抹在伤口上 9 天，并强烈加强以继续每天两次使用指定的药片。 参与者将在受伤后的第二天、第五天和第八天到诊所进行伤口愈合的后续照片。 第一个干预期以四个星期的清除期结束，然后第二个磨合期开始遵循相同的程序。

益生菌片剂和益生菌油（推荐剂量）含有 2x10^8 CFU 罗伊氏乳杆菌。 安慰剂片剂和油的大小和成分相同，但未添加益生菌菌株。 药片和油包装在相同的罐/瓶中，并带有颜色编码。 在分析完成之前，代码将对调查人员保密。 药片和油均由 BIOGAIA AB 提供。

临床程序和取样

所有临床程序和样本采集都将由哥本哈根大学健康与医学科学学院牙科研究所、龋病学、牙髓病学、儿科牙科和临床遗传学部门的合格和授权牙医进行。 收集的样本（唾液、伤口渗出液和细菌涂片）将储存在 -80 °C 的冰箱中，直到收集所有患者的所有样本 - 最多六个月。 同时运行所有收集的样品可以有效地进行实验室分析并避免错误。

钻孔活检：在第八天，借助活检钻孔器，将在硬腭粘膜中形成直径为 3.5 毫米、深度约为 1.5 毫米的标准圆形伤口。 活组织检查在无菌条件下进行，局部麻醉使用 2% 利多卡因联合肾上腺素进行局部止血。 使用手术刀去除表面上皮和下面的浅表结缔组织，根据哥本哈根大学牙科研究所的生物安全规定将其丢弃。 受伤后，将用口内照相机对伤口部位进行拍照（盲码），在伤口周围放置标准尺寸的 6 毫米直径模板作为参考。 参与者将在受伤后的第二天、第五天和第八天前往牙科诊所，由博士生 Gina Castiblanco 拍摄伤口照片。 照片上的伤口大小将由两个评分者测量，并在软件（Canvas 7，美国 ACD 系统）的帮助下表示为伤口表面积相对于标准标签大小的比率。 终点将是初始伤口大小的百分比，在受伤后的第二天、第五天和第八天测量。

唾液采样：将收集来自每个受试者的六个未刺激的全唾液 (UWS) 样本（一个在基线，一个在磨合期之后，一个在干预期结束时）。 对于 USW 收集，参与者将坐在舒适的位置，头部略微弯曲。 要求参与者睁大眼睛并尽可能少做动作，包括吞咽。 然后，他/她被要求用水漱口并再次吐出。 此后，他/她被指示让唾液从嘴里流到指定的塑料杯中十分钟。 等分的唾液 (1.5 ml) 将立即置于冰上并储存在 -80 °C 的冰箱中，直到进一步分析。

创面渗液采集：共采集8个创面渗液样本。 伤口部位将用棉球擦干，并将 periopaper 条（ProFlow，Amityville，NY，USA）轻轻压在伤口上 20 秒。 在血液污染的情况下，条带被排出并在五分钟后重复取样。 使用 Peritron 8000 (Proflow) 记录渗出液体积，并以 µL 表示。 一根试纸条可容纳约 0.1-0.4 µL 渗出液。 然后将条带转移到塑料管中并储存在 -80 度直至进一步分析。

细菌涂片采集：采集四份细菌涂片。 将无菌拭子穿过伤口部位，放入塑料管中并冷冻储存在 -80 °C 直至进一步分析。 将对涂片进行常规微生物培养，以检测通常与伤口愈合延迟相关的细菌种类（β-溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌）的存在/不存在和数量。

对疼痛和不适的感知：在每个磨合期开始时，将向参与者提供一页日志，以便他们根据 VAS 量表记录药片的摄入量以及他们自己对疼痛和不适的感知。 还鼓励参与者记录可能影响结果的因素（身体活动和酒精饮料的数量）。 参与者将被要求在干预期结束时携带填写好的日志。

感知压力和一般健康：在干预期结束时，将要求参与者填写经过验证的一般健康问卷 GHQ-12 (10) 和经过验证的感知压力量表 (11)。 众所周知，这些因素（对压力的自我感知和总体健康状况）可能是伤口愈合结果的共同因素。

合规性：在每个干预期开始时，将向参与者提供足够使用 16 天的药片和足够使用 9 天的外用油。 将通过参与者完成日志来检查合规性，日志中记录了药片和油的每日摄入量。 对于最后一次预约，参与者将被要求携带剩余的药片和油进行计数/估算。

数据分析：所有数据将使用开源统计软件“R”进行处理并控制正态分布。 多变量和单变量方差分析（MANOVA 和 ANOVA）将用于评估受试者随时间的变化。 小于 0.05 的 p 值将被视为具有统计显着性。 获得的结果将发表在国际公认的期刊上。 如果结果无法在期刊上发表，可以在牙科大学的网站上找到。 我们强调将公布正面、负面和不确定的结果。

数据管理：所有收集的数据将按照《个人数据处理法》和《卫生法》进行处理。 在包含时，参与者将被分配一个唯一的号码和一个没有个人识别号码的单独协议。 这项研究不会报告给“Datatilsynet”，因为它是一个私人科学健康项目