Vliv probiotik na hojení ran v dutině ústní – pilotní studie (PROWOUND)

Intervence: po informovaném souhlasu a základním sběru klinických dat (věk, pohlaví) budou účastníci náhodně rozděleni do jednoho z pořadí ošetření. Jako záběhové období jim bude podávána zásoba probiotických nebo placebových tablet na sedm dní. Účastníci jsou instruováni, aby užívali dvě tablety denně (jednu ráno a jednu večer, dny 0-7) a jsou požádáni, aby se zdrželi jakýchkoli dalších potravin nebo doplňků obsahujících probiotika. Osmý den bude účastník navštěvovat kliniky a bude provedena punčová biopsie. V závislosti na alokační skupině bude dodáván probiotický nebo placebový olej. Účastník bude instruován, aby olej na ránu nanášel lokálně pomocí plastového mikroštětečku po dobu 9 dnů každý večer a silně posílil, aby pokračoval s přidělenými tabletami dvakrát denně. Účastník bude navštěvovat kliniky ve dnech dva, pátý a osmý po poranění za účelem následných fotografií hojení ran. První intervenční období končí vymývacím obdobím v délce čtyř týdnů a poté začíná druhé zaváděcí období intervence podle stejných postupů.

Probiotické tablety a probiotický olej (v doporučené dávce) obsahují 2x10^8 CFU Lactobacillus reuteri. Jak tablety placeba, tak olej jsou identické co do velikosti a složení, ale bez přidání probiotických kmenů. Tablety a olej jsou baleny ve stejných květináčích/lahvích s barevným kódováním. Kód bude vyšetřovatelům uchován, dokud nebude analýza dokončena. Tablety i olej dodává BIOGAIA AB.

Klinické postupy a odběry

Všechny klinické výkony a odběry vzorků bude provádět kvalifikovaný a autorizovaný zubní lékař z Ústavu odontologie, sekce kariologie, endodoncie, dětské stomatologie a klinické genetiky Fakulty zdravotnictví a lékařských věd Univerzity v Kodani. Odebrané vzorky (sliny, exsudát z rány a bakteriální stěr) budou uchovávány v mrazáku při -80 °C, dokud nebudou odebrány všechny vzorky od všech pacientů – maximálně po dobu šesti měsíců. Spuštění všech odebraných vzorků současně umožňuje provádění laboratorních analýz efektivně a zabraňuje chybám.

Punch biopsie: Osmý den se ve sliznici tvrdého patra vytvoří pomocí bioptického razníku standardizovaná kruhová rána o průměru 3,5 mm a hloubce přibližně 1,5 mm. Biopsie se provádí za aseptických podmínek a lokální anestezie lidokainem 2% v kombinaci s adrenalinem pro lokální hemostázu. K odstranění povrchového epitelu a podkladové povrchové pojivové tkáně se používá skalpel, který bude zlikvidován v souladu s předpisy pro biologickou bezpečnost Ústavu zubního lékařství, University of Copenhagen. Po poranění bude místo rány vyfotografováno (slepě kódováno) intraorální kamerou, přičemž se kolem rány jako reference umístí šablona standardní velikosti o průměru 6 mm. Účastník bude navštěvovat zubní kliniky ve dnech dva, pět a osm po poranění, aby si nechal vyfotografovat ránu doktorandkou Gina Castiblanco. Velikost rány na fotografiích bude měřena dvěma hodnotiteli a bude vyjádřena jako poměr plochy povrchu rány vzhledem ke standardní velikosti štítku pomocí softwaru (Canvas 7, ACD Systems of America). Konečným bodem bude procento počáteční velikosti rány, měřeno ve dnech dva, pět a osm po poranění.

Odběr vzorků slin: od každého subjektu bude odebráno šest vzorků nestimulovaných celých slin (UWS) (jeden na začátku, jeden hned po období záběhu a jeden na konci období intervence). Při odběru USW bude účastník sedět v pohodlné poloze s mírně skloněnou hlavou. Účastník je požádán, aby měl oči otevřené a dělal co nejméně pohybů, včetně polykání. Poté je požádán, aby vypláchl ústa vodou a znovu ji vyplivl. Poté je instruován, aby nechal po dobu deseti minut vytékat sliny z úst do určeného plastového kelímku. Alikvoty slin (1,5 ml) se okamžitě umístí na led a skladují se v mrazáku při -80 °C až do další analýzy.

Odběr exsudátu z rány: Celkem bude odebráno osm vzorků exsudátu z rány. Místo rány se osuší bavlněnými peletami a na ránu se jemně přitlačí proužky periopaperu (ProFlow, Amityville, NY, USA) po dobu 20 sekund. V případě kontaminace krve se proužek vybije a po pěti minutách se odběr opakuje. Objem exsudátu se zaznamená pomocí Peritron 8000 (Proflow) a vyjádří se v ul. Jeden pásek pojme přibližně 0,1-0,4 µl exsudátu. Proužky jsou poté přeneseny do plastových zkumavek a skladovány při -80 °C až do další analýzy.

Odběr bakteriálního nátěru: budou odebrány čtyři bakteriální nátěry. Místem rány se prostrčí sterilní tampon, umístí se do plastové zkumavky a až do další analýzy se skladuje zmrazený při -80 °C. Nátěry budou podrobeny konvenční mikrobiální kultivaci za účelem detekce přítomnosti/nepřítomnosti a počtu bakteriálních druhů běžně spojených se zpožděným hojením ran (β-hemolytické streptokoky a S. aureus).

Vnímání bolesti a nepohodlí: Na začátku každého záběhového období bude účastníkům předán jednostránkový deník, aby si mohli zaznamenat příjem tablet a své vlastní vnímání bolesti a nepohodlí podle stupnice VAS. Účastník je také vyzván, aby zaregistroval faktory, které by mohly ovlivnit výsledek (fyzická aktivita a počet alkoholických nápojů). Účastník bude vyzván, aby přinesl vyplněný deník na konci intervenčního období.

Vnímaný stres a celkové zdraví: na konci období intervence bude účastník požádán, aby vyplnil validovaný General Health Questionnaire GHQ-12 (10) a validovanou škálu Perceived Stress Scale (11). Tyto faktory (sebevnímání stresu a celkový zdravotní stav) jsou známy jako možné spoluzakladatele výsledků hojení ran.

Dodržování: Na začátku každého intervenčního období bude účastníkům poskytnuto dostatečné množství tablet na 16 dní a oleje pro místní použití na devět dní aplikace. Splnění bude kontrolováno prostřednictvím vyplnění deníku účastníka, ve kterém je evidován denní příjem tablet a aplikace oleje. Na poslední schůzku budou účastníci požádáni, aby si přinesli zbývající tablety a olej pro počítání/odhad.

Analýza dat: všechna data budou zpracována pomocí open source statistického softwaru "R" a kontrolována pro normální distribuci. Vícerozměrná a jednorozměrná analýza rozptylu (MANOVA a ANOVA) bude použita k posouzení změn v rámci subjektu v průběhu času. P-hodnota menší než 0,05 bude považována za statisticky významnou. Získané výsledky budou publikovány v mezinárodně uznávaném časopise. Pokud výsledky nelze publikovat v časopise, budou k dispozici na webových stránkách Univerzity odontologického ústavu. Klademe důraz na to, že budou zveřejněny pozitivní, negativní a neprůkazné výsledky.

Správa údajů: se všemi shromážděnými údaji bude nakládáno v souladu se zákonem o zpracování osobních údajů a „Zdravotním zákonem“. Při zařazení bude účastníkům přiděleno jedinečné číslo a samostatný protokol bez rodného čísla. Tato studie nebude hlášena "Datatilsynet", protože se jedná o soukromý vědecký projekt v oblasti zdraví