Effekt av probiotika på oral sårläkning - Pilotstudie (PROWOUND)

Intervention: efter informerat samtycke och baslinjeinsamling av kliniska data (ålder, kön), kommer deltagarna att slumpmässigt tilldelas en av behandlingarnas ordning. Som en inkörningsperiod kommer de att få ett utbud av probiotiska eller placebotabletter som räcker till i sju dagar. Deltagarna instrueras att ta två tabletter dagligen (en på morgonen och en på kvällen, dag 0-7) och uppmanas att avstå från andra livsmedel eller kosttillskott som innehåller probiotika. Dag åtta kommer deltagaren till klinikerna och en stansbiopsi kommer att utföras. Beroende på tilldelningsgrupp kommer probiotisk eller placeboolja att levereras. Deltagaren kommer att instrueras att applicera oljan lokalt på såret med en plastmikroborste i 9 dagar varje kväll, och starkt förstärkt att fortsätta med de tilldelade tabletterna två gånger dagligen. Deltagaren kommer att närvara vid klinikerna dag två, fem och åtta efter såret för uppföljande fotografier av sårläkning. Den första interventionsperioden avslutas med en uttvättningsperiod på fyra veckor, och sedan startar den andra inkörningsperioden efter samma rutiner.

De probiotiska tabletterna och den probiotiska oljan (vid den rekommenderade dosen) innehåller 2x10^8 CFU av Lactobacillus reuteri. Både placebotabletterna och oljan är identiska i storlek och sammansättning men utan tillsats av de probiotiska stammarna. Tabletterna och oljan är förpackade i identiska krukor/flaskor med färgkodning. Koden kommer att bevaras från utredarna tills analysen är klar. Både tabletterna och oljan tillhandahålls av BIOGAIA AB.

Kliniska förfaranden och provtagning

Alla kliniska procedurer och provinsamlingar kommer att utföras av en kvalificerad och auktoriserad tandläkare från Institutet för Odontologi, sektionen för kariologi, endodonti, pediatrisk tandvård och klinisk genetik, fakulteten för hälso- och medicinvetenskap, Köpenhamns universitet. Insamlade prover (saliv, sårexsudat och bakterieutstryk) kommer att förvaras i en frys vid -80 °C tills alla prover från alla patienter har samlats in - i maximalt sex månader. Genom att köra alla insamlade prover samtidigt kan laboratorieanalyser utföras effektivt och undvika fel.

Stansbiopsi: på dag åtta skapas ett standardiserat cirkulärt sår med 3,5 mm diameter och cirka 1,5 mm djupt i slemhinnan i den hårda gommen med hjälp av en biopsistans. Biopsien utförs under aseptiska förhållanden och lokalbedövning med lidokain 2% kombinerat med epinefrin för lokal hemostas. En skalpell används för att avlägsna ytepitel och underliggande ytlig bindväv, som kommer att kasseras enligt biosäkerhetsföreskrifter från Tandvårdsinstitutet, Köpenhamns universitet. Efter sårbilden kommer sårstället att fotograferas (blindkodas) med en intraoral kamera, varvid en mall av standardstorlek 6 mm i diameter placeras runt såret som referens. Deltagaren kommer att gå till tandvårdsklinikerna dag två, fem och åtta efter skadorna för att få ett fotografi av såret taget av doktoranden Gina Castiblanco. Sårstorleken på fotografier kommer att mätas med två bedömare och kommer att uttryckas som förhållandet mellan sårytan i förhållande till standardetikettstorleken med hjälp av programvara (Canvas 7, ACD Systems of America). Slutpunkten kommer att vara procentandelen av initial sårstorlek, uppmätt dag två, fem och åtta efter såret.

Salivprovtagning: sex prover av ostimulerad hel saliv (UWS) från varje försöksperson kommer att samlas in (ett vid baslinjen, ett direkt efter inkörningsperioden och ett i slutet av interventionsperioden). För USW-insamling kommer deltagaren att sitta i en bekväm position med huvudet lätt böjt. Deltagaren uppmanas att hålla ögonen öppna och göra så få rörelser som möjligt, inklusive att svälja. Sedan uppmanas han/hon att skölja munnen i vatten och spotta ut den igen. Därefter instrueras han/hon att låta saliv rinna ut ur munnen ner i en avsedd plastmugg i tio minuter. Alikvoter av saliv (1,5 ml) kommer omedelbart att placeras på is och förvaras i en frys vid -80 °C tills vidare analys.

Samling av sårexsudat: totalt åtta prover av sårexsudat kommer att samlas in. Sårstället kommer att torkas med bomullspellets och periopaper-remsor (ProFlow, Amityville, NY, USA) kommer att pressas försiktigt på såret i 20 s. Vid blodförorening töms remsan och provtagningen upprepas efter fem minuter. Volymen av exsudat registreras med en Peritron 8000 (Proflow) och uttrycks i µL. En remsa rymmer ungefär 0,1-0,4 µL exsudat. Remsorna överförs sedan till plaströr och lagras vid -80°C tills vidare analys.

Insamling av bakterieutstryk: fyra bakterieutstryk kommer att tas. En steril pinne kommer att passera genom sårstället, placeras i ett plaströr och förvaras fryst vid -80 °C tills vidare analys. Utstrykarna kommer att utsättas för konventionell mikrobiell odling för att detektera närvaron/frånvaron och antalet bakteriearter som vanligtvis förknippas med fördröjd sårläkning (β-hemolytiska streptokocker och S. aureus).

Uppfattning om smärta och obehag: en ensidig loggbok kommer att lämnas till deltagarna i början av varje inkörningsperiod så att de kan registrera intaget av tabletter och sin egen uppfattning om smärta och obehag enligt en VAS-skala. Deltagaren uppmanas också att registrera faktorer som eventuellt kan påverka resultatet (fysisk aktivitet och antal alkoholhaltiga drycker). Deltagaren kommer att bli ombedd att ta med den ifyllda loggboken i slutet av interventionsperioden.

Upplevd stress och allmän hälsa: i slutet av interventionsperioden kommer deltagaren att bli ombedd att fylla i det validerade General Heath Questionnaire GHQ-12 (10) och den validerade Perceived Stress Scale (11). Dessa faktorer (självuppfattning om stress och allmän hälsa) är kända för att vara möjliga medgrundare till sårläkningsresultat.

Överensstämmelse: i början av varje interventionsperiod kommer deltagarna att förses med tabletter som räcker för 16 dagar och olja för lokal användning tillräckligt för applicering i nio dagar. Efterlevnaden kommer att kontrolleras genom att deltagaren fyller i en loggbok där det dagliga intaget av tabletter och oljeapplicering registreras. För det sista mötet kommer deltagarna att uppmanas att ta med resterande tabletter och olja för räkning/uppskattning.

Dataanalys: all data kommer att behandlas med statistikprogramvaran "R" med öppen källkod och kontrolleras för normal distribution. Multivariat och univariat variansanalys (MANOVA och ANOVA) kommer att användas för att bedöma förändringar inom ämnet över tid. Ett p-värde mindre än 0,05 kommer att anses vara statistiskt signifikant. De erhållna resultaten kommer att publiceras i en internationellt erkänd tidskrift. Om resultaten inte kan publiceras i en tidskrift kommer de att finnas tillgängliga på webbplatsen för University of the Odontology Institute. Vi lägger vikt vid att positiva, negativa och ofullständiga resultat kommer att publiceras.

Datahantering: all insamlad data kommer att behandlas i enlighet med lagen om behandling av personuppgifter och "Hälsolagen". Vid inkluderingen kommer deltagarna att tilldelas ett unikt nummer och ett separat protokoll utan personnummer. Denna studie kommer inte att rapporteras till "Datatilsynet" eftersom det är ett privat vetenskapligt hälsoprojekt