Efeito dos probióticos na cicatrização de feridas orais - Estudo piloto (PROWOUND)

Intervenção: após consentimento informado e coleta inicial de dados clínicos (idade, sexo), os participantes serão aleatoriamente designados para um dos tratamentos. Como um período inicial, eles receberão um suprimento de comprimidos de probióticos ou placebo suficientes para sete dias. Os participantes são instruídos a tomar dois comprimidos diariamente (um pela manhã e outro à noite, dias 0-7) e são solicitados a abster-se de qualquer outro alimento ou suplemento que contenha probióticos. No oitavo dia, o participante comparecerá às clínicas e será realizada uma biópsia por punção. Dependendo do grupo de alocação, será fornecido óleo probiótico ou placebo. O participante será instruído a aplicar o óleo localmente na ferida com um micropincel de plástico por 9 dias todas as noites, e fortemente reforçado para continuar com os comprimidos designados duas vezes ao dia. O participante comparecerá às clínicas nos dias dois, cinco e oito após o ferimento para fotografias de acompanhamento da cicatrização do ferimento. O primeiro período de intervenção termina com um período de wash-out de quatro semanas e, em seguida, o segundo período de intervenção começa seguindo os mesmos procedimentos.

Os comprimidos probióticos e o óleo probiótico (na dose recomendada) contêm 2x10^8 CFU de Lactobacillus reuteri. Tanto os comprimidos placebo quanto o óleo são idênticos em tamanho e composição, mas sem a adição das cepas probióticas. Os comprimidos e o óleo são embalados em potes/frascos idênticos com código de cores. O código será mantido em sigilo pelos investigadores até que a análise seja concluída. Tanto os comprimidos quanto o óleo são fornecidos pela BIOGAIA AB.

Procedimentos clínicos e amostragem

Todos os procedimentos clínicos e coletas de amostras serão conduzidos por um dentista qualificado e autorizado do Instituto de Odontologia, Seção de Cariologia, Endodontia, Odontopediatria e Genética Clínica, Faculdade de Saúde e Ciências Médicas, Universidade de Copenhague. As amostras coletadas (saliva, exsudato da ferida e esfregaço bacteriano) serão armazenadas em freezer a -80 °C até que todas as amostras de todos os pacientes sejam coletadas - por no máximo seis meses. A execução de todas as amostras coletadas ao mesmo tempo permite que as análises laboratoriais sejam realizadas de forma eficiente e evita erros.

Biópsia por punch: no oitavo dia, uma ferida circular padronizada de 3,5 mm de diâmetro e aproximadamente 1,5 mm de profundidade será criada na mucosa do palato duro com o auxílio de um punch de biópsia. A biópsia é realizada sob condições assépticas e anestesia local com lidocaína 2% combinada com epinefrina para hemostasia local. Um bisturi é usado para remover o epitélio superficial e o tecido conjuntivo superficial subjacente, que serão descartados de acordo com os regulamentos de biossegurança do Instituto de Odontologia da Universidade de Copenhague. Após o ferimento, o local da ferida será fotografado (código cego) com uma câmera intraoral, colocando um modelo de tamanho padrão de 6 mm de diâmetro ao redor da ferida como referência. O participante comparecerá às clínicas odontológicas nos dias dois, cinco e oito após o ferimento para ter uma fotografia do ferimento tirada pela estudante de doutorado Gina Castiblanco. O tamanho da ferida nas fotografias será medido por dois avaliadores e será expresso como a razão da área da superfície da ferida em relação ao tamanho padrão da etiqueta com o auxílio de software (Canvas 7, ACD Systems of America). O ponto final será a porcentagem do tamanho inicial do ferimento, medido nos dias dois, cinco e oito após o ferimento.

Amostragem de saliva: seis amostras de saliva total não estimulada (UWS) de cada sujeito serão coletadas (uma na linha de base, uma logo após o período inicial e uma no final do período de intervenção). Para a coleta do USW, o participante ficará sentado em posição confortável com a cabeça levemente inclinada. O participante é solicitado a manter os olhos abertos e fazer o menor número possível de movimentos, incluindo a deglutição. Em seguida, é solicitado que enxágue a boca com água e cuspa novamente. Depois disso, ele/ela é instruído a deixar a saliva escorrer da boca para um copo de plástico designado por dez minutos. Alíquotas de saliva (1,5 ml) serão imediatamente colocadas em gelo e armazenadas em freezer a -80 °C até análise posterior.

Coleta de exsudato da ferida: oito amostras de exsudato da ferida serão coletadas no total. O local da ferida será seco com bolinhas de algodão e tiras de periopaper (ProFlow, Amityville, NY, EUA) serão pressionadas suavemente sobre a ferida por 20 s. Em caso de contaminação sanguínea, a tira é descartada e a amostragem é repetida após cinco minutos. O volume de exsudato é registrado usando um Peritron 8000 (Proflow) e expresso em µL. Uma tira contém aproximadamente 0,1-0,4 µL de exsudato. As tiras são então transferidas para tubos de plástico e armazenadas a -80 até análise posterior.

Coleta de esfregaço bacteriano: quatro esfregaços bacterianos serão amostrados. Um swab estéril será passado pelo local da ferida, colocado em um tubo plástico e armazenado congelado a -80 °C até análise posterior. Os esfregaços serão submetidos a cultivo microbiano convencional para detecção da presença/ausência e contagem de espécies bacterianas comumente associadas ao retardo na cicatrização de feridas (estreptococos β-hemolíticos e S. aureus).

Percepção de dor e desconforto: um logbook de uma página será entregue aos participantes no início de cada período de run-in para que eles possam registrar a ingestão de comprimidos e sua própria percepção de dor e desconforto de acordo com uma escala VAS. O participante também é estimulado a registrar fatores que possivelmente possam influenciar o resultado (atividade física e número de bebidas alcoólicas). Será solicitado ao participante que traga o diário de bordo preenchido no final do período de intervenção.

Estresse percebido e saúde geral: ao final do período de intervenção, o participante será solicitado a preencher o Questionário de Saúde Geral validado GHQ-12 (10) e a Escala de Estresse Percebido validado (11). Esses fatores (autopercepção de estresse e saúde geral) são conhecidos como possíveis cofundadores dos resultados da cicatrização de feridas.

Cumprimento: no início de cada período de intervenção, os participantes receberão comprimidos suficientes para 16 dias e óleo para uso tópico suficiente para nove dias de aplicação. A adesão será verificada através do preenchimento pelo participante de um diário de bordo no qual é registrada a ingestão diária de comprimidos e a aplicação do óleo. Para a última consulta, será pedido aos participantes que tragam os restantes comprimidos e óleo para contagem/avaliação.

Análise de dados: todos os dados serão processados ​​com o software de estatística de código aberto "R" e controlados para distribuição normal. A análise de variância multivariada e univariada (MANOVAs e ANOVAs) será usada para avaliar a mudança dentro do sujeito ao longo do tempo. Um valor de p inferior a 0,05 será considerado estatisticamente significativo. Os resultados obtidos serão publicados em revista internacionalmente reconhecida. Caso os resultados não possam ser publicados em periódico, estarão disponíveis no site do Instituto de Odontologia da Universidade. Ressaltamos que resultados positivos, negativos e inconclusivos serão publicados.

Gestão de dados: todos os dados recolhidos serão tratados em conformidade com a Lei do Tratamento de Dados Pessoais e "Lei da Saúde". Na inclusão, os participantes receberão um número único e um protocolo separado sem número de identificação pessoal. Este estudo não será relatado ao "Datatilsynet", pois é um projeto científico privado de saúde