Efecto de los probióticos en la curación de heridas orales: estudio piloto (PROWOUND)

Intervención: después del consentimiento informado y la recolección inicial de datos clínicos (edad, sexo), los participantes serán asignados aleatoriamente a uno de los tratamientos. Como período inicial, se les dará un suministro de tabletas de probiótico o placebo suficiente para siete días. Se instruye a los participantes para que tomen dos tabletas al día (una por la mañana y otra por la noche, los días 0 a 7) y se les pide que se abstengan de cualquier otro alimento o suplemento que contenga probióticos. El día ocho, el participante acudirá a las clínicas y se le realizará una biopsia en sacabocados. Dependiendo del grupo de asignación, se suministrará aceite probiótico o placebo. Se le indicará al participante que aplique el aceite localmente en la herida con un microcepillo de plástico durante 9 días todas las noches y se le reforzará fuertemente para que continúe con las tabletas asignadas dos veces al día. El participante asistirá a las clínicas los días dos, cinco y ocho después de la herida para tomar fotografías de seguimiento de la cicatrización de la herida. El primer período de intervención termina con un período de lavado de cuatro semanas, y luego comienza el segundo período de intervención siguiendo los mismos procedimientos.

Las tabletas probióticas y el aceite probiótico (a la dosis recomendada) contienen 2x10^8 CFU de Lactobacillus reuteri. Tanto las tabletas de placebo como el aceite son idénticos en tamaño y composición pero sin la adición de las cepas probióticas. Los comprimidos y el aceite se envasan en botes/botellas idénticos con código de colores. El código se mantendrá oculto a los investigadores hasta que finalice el análisis. Tanto las tabletas como el aceite son proporcionados por BIOGAIA AB.

Procedimientos clínicos y toma de muestras

Todos los procedimientos clínicos y la recolección de muestras serán realizados por un dentista calificado y autorizado del Instituto de Odontología, Sección de Cariología, Endodoncia, Odontopediatría y Genética Clínica, Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud, Universidad de Copenhague. Las muestras recolectadas (saliva, exudado de heridas y frotis bacteriano) se almacenarán en un congelador a -80 °C hasta que se recolecten todas las muestras de todos los pacientes, durante un máximo de seis meses. El procesamiento de todas las muestras recolectadas al mismo tiempo permite que los análisis de laboratorio se realicen de manera eficiente y evita errores.

Biopsia en sacabocados: en el octavo día se creará una herida circular estandarizada de 3,5 mm de diámetro y aproximadamente 1,5 mm de profundidad en la mucosa del paladar duro con la ayuda de un sacabocados de biopsia. La biopsia se realiza en condiciones asépticas y con anestesia local utilizando lidocaína al 2% combinada con epinefrina para la hemostasia local. Se utiliza un bisturí para eliminar el epitelio superficial y el tejido conjuntivo superficial subyacente, que se desecharán de acuerdo con las normas de bioseguridad del Instituto de Odontología de la Universidad de Copenhague. Después de la herida, el sitio de la herida se fotografiará (código ciego) con una cámara intraoral, colocando una plantilla de tamaño estándar de 6 mm de diámetro alrededor de la herida como referencia. El participante asistirá a las clínicas dentales los días dos, cinco y ocho después de la herida para que la estudiante de doctorado Gina Castiblanco le tome una fotografía de la herida. Dos evaluadores medirán el tamaño de la herida en las fotografías y se expresará como la proporción del área de la superficie de la herida en relación con el tamaño estándar de la etiqueta con la ayuda del software (Canvas 7, ACD Systems of America). El criterio de valoración será el porcentaje del tamaño inicial de la herida, medido en los días dos, cinco y ocho posteriores a la herida.

Muestreo de saliva: se recolectarán seis muestras de saliva total no estimulada (UWS) de cada sujeto (una al inicio, una justo después del período inicial y una al final del período de intervención). Para la recolección de RSU, el participante estará sentado en una posición cómoda con la cabeza ligeramente inclinada. Se le pide al participante que mantenga los ojos abiertos y haga la menor cantidad de movimientos posible, incluida la deglución. Luego, se le pide que se enjuague la boca con agua y la escupa nuevamente. A partir de entonces, se le indica que deje que la saliva fluya de la boca por un vaso de plástico designado durante diez minutos. Inmediatamente se colocarán alícuotas de saliva (1,5 ml) en hielo y se almacenarán en un congelador a -80 °C hasta su posterior análisis.

Recogida de exudado de heridas: en total se recogerán ocho muestras de exudado de heridas. El sitio de la herida se secará con bolitas de algodón y se presionarán suavemente tiras de papel perio (ProFlow, Amityville, NY, EE. UU.) sobre la herida durante 20 s. En caso de contaminación con sangre, la tira se descarga y el muestreo se repite después de cinco minutos. El volumen de exudado se registra usando un Peritron 8000 (Proflow) y se expresa en µL. Una tira contiene aproximadamente 0,1-0,4 µL de exudado. A continuación, las tiras se transfieren a tubos de plástico y se almacenan a -80ºC hasta su posterior análisis.

Recolección de frotis bacterianos: se tomarán muestras de cuatro frotis bacterianos. Se pasará un hisopo estéril a través del sitio de la herida, se colocará en un tubo de plástico y se almacenará congelado a -80 °C hasta su posterior análisis. Los frotis se someterán a cultivo microbiano convencional para detectar la presencia/ausencia y recuentos de especies bacterianas comúnmente asociadas con el retraso en la cicatrización de heridas (estreptococos β-hemolíticos y S. aureus).

Percepción de dolor y molestias: se entregará a los participantes una bitácora de una página al inicio de cada periodo de rodaje para que registren la ingesta de comprimidos y su propia percepción de dolor y molestias según una escala EVA. También se anima al participante a registrar los factores que posiblemente podrían influir en el resultado (actividad física y número de bebidas alcohólicas). Se le pedirá al participante que traiga el libro de registro completo al final del período de intervención.

Estrés percibido y salud general: al final del período de intervención, se le pedirá al participante que complete el Cuestionario de Salud General validado GHQ-12 (10) y la Escala de Estrés Percibido validada (11). Se sabe que estos factores (autopercepción del estrés y salud general) son posibles cofundadores de los resultados de cicatrización de heridas.

Cumplimiento: al inicio de cada período de intervención, se proporcionará a los participantes tabletas suficientes para 16 días y aceite de uso tópico suficiente para nueve días de aplicación. El cumplimiento se comprobará mediante la cumplimentación por parte del participante de una bitácora en la que se registre la ingesta diaria de comprimidos y aplicación de aceite. Para la última cita, se les pedirá a los participantes que traigan las tabletas y el aceite restantes para contar/estimar.

Análisis de datos: todos los datos se procesarán con el software de estadísticas de código abierto "R" y se controlarán para su distribución normal. Se utilizarán análisis de varianza multivariante y univariante (MANOVA y ANOVA) para evaluar el cambio dentro del sujeto a lo largo del tiempo. Un valor de p inferior a 0,05 se considerará estadísticamente significativo. Los resultados obtenidos serán publicados en una revista reconocida internacionalmente. Si los resultados no pueden ser publicados en una revista, estarán disponibles en el sitio web del Instituto Universitario de Odontología. Hacemos énfasis en que se publicarán resultados positivos, negativos y no concluyentes.

Gestión de datos: todos los datos recopilados serán tratados de conformidad con la Ley de Tratamiento de Datos Personales y "La Ley de Salud". Al momento de la inclusión, a los participantes se les asignará un número único y un protocolo separado sin número de identificación personal. Este estudio no será reportado a "Datatilsynet" ya que es un proyecto científico privado de salud