Effetto dei probiotici sulla guarigione delle ferite orali - Studio pilota (PROWOUND)

Intervento: dopo il consenso informato e la raccolta di base dei dati clinici (età, sesso), i partecipanti verranno assegnati in modo casuale a uno dell'ordine dei trattamenti. Come periodo di rodaggio, riceveranno una scorta di compresse probiotiche o placebo sufficienti per sette giorni. Ai partecipanti viene chiesto di assumere due compresse al giorno (una al mattino e una alla sera, giorni 0-7) e viene chiesto di astenersi da qualsiasi altro alimento o integratore contenente probiotici. L'ottavo giorno, il partecipante parteciperà alle cliniche e verrà eseguita una biopsia del pugno. A seconda del gruppo di assegnazione, verrà fornito olio probiotico o placebo. Il partecipante verrà incaricato di applicare l'olio localmente sulla ferita con un microbrush di plastica per 9 giorni ogni sera, e fortemente rinforzato per continuare con le compresse assegnate due volte al giorno. Il partecipante parteciperà alle cliniche nei giorni due, cinque e otto dopo la ferita per le fotografie di follow-up della guarigione della ferita. Il primo periodo di intervento termina con un periodo di wash-out di quattro settimane, quindi il secondo periodo di rodaggio inizia seguendo le stesse procedure.

Le compresse probiotiche e l'olio probiotico (alla dose consigliata) contengono 2x10^8 UFC di Lactobacillus reuteri. Sia le compresse placebo che l'olio sono identici per dimensioni e composizione ma senza l'aggiunta dei ceppi probiotici. Le compresse e l'olio sono confezionati in vasetti/flaconi identici con codice colore. Il codice sarà tenuto agli investigatori fino al termine dell'analisi. Sia le compresse che l'olio sono forniti da BIOGAIA AB.

Procedure cliniche e campionamento

Tutte le procedure cliniche e le raccolte di campioni saranno condotte da un dentista qualificato e autorizzato dall'Istituto di Odontoiatria, Sezione di Cariologia, Endodonzia, Odontoiatria Pediatrica e Genetica Clinica, Facoltà di Salute e Scienze Mediche, Università di Copenaghen. I campioni raccolti (saliva, essudato della ferita e striscio batterico) verranno conservati in un congelatore a -80 °C fino a quando non saranno raccolti tutti i campioni di tutti i pazienti, per un massimo di sei mesi. L'esecuzione simultanea di tutti i campioni raccolti consente di eseguire le analisi di laboratorio in modo efficiente ed evitare errori.

Punch biopsia: l'ottavo giorno verrà creata una ferita circolare standardizzata di 3,5 mm di diametro e circa 1,5 mm di profondità nella mucosa del palato duro con l'ausilio di un punch bioptico. La biopsia viene eseguita in condizioni asettiche e in anestesia locale utilizzando lidocaina 2% combinata con epinefrina per l'emostasi locale. Un bisturi viene utilizzato per rimuovere l'epitelio superficiale e il tessuto connettivo superficiale sottostante, che verranno scartati secondo le norme di biosicurezza dell'Istituto di odontoiatria dell'Università di Copenaghen. Dopo la ferita, il sito della ferita verrà fotografato (codificato alla cieca) con una fotocamera intraorale, posizionando un modello di diametro standard di 6 mm attorno alla ferita come riferimento. Il partecipante parteciperà alle cliniche dentistiche nei giorni due, cinque e otto dopo la ferita per avere una fotografia della ferita scattata dalla studentessa di dottorato Gina Castiblanco. La dimensione della ferita sulle fotografie sarà misurata da due valutatori e sarà espressa come rapporto tra l'area della superficie della ferita rispetto alla dimensione standard dell'etichetta con l'ausilio di un software (Canvas 7, ACD Systems of America). L'endpoint sarà la percentuale della dimensione iniziale della ferita, misurata nei giorni due, cinque e otto dopo la ferita.

Campionamento della saliva: verranno raccolti sei campioni di saliva intera non stimolata (SU) da ciascun soggetto (uno al basale, uno subito dopo il periodo di rodaggio e uno alla fine del periodo di intervento). Per la raccolta dei rifiuti solidi urbani, il partecipante sarà seduto in una posizione comoda con la testa leggermente piegata. Al partecipante viene chiesto di tenere gli occhi aperti e di fare il minor numero di movimenti possibile, inclusa la deglutizione. Quindi, gli viene chiesto di sciacquare la bocca con acqua e sputarla di nuovo. Successivamente, gli viene chiesto di far defluire la saliva dalla bocca in un bicchiere di plastica designato per dieci minuti. Aliquote di saliva (1.5 ml) saranno immediatamente poste in ghiaccio e conservate in freezer a -80°C fino a ulteriori analisi.

Raccolta dell'essudato della ferita: verranno raccolti in totale otto campioni di essudato della ferita. Il sito della ferita verrà asciugato con pellet di cotone e strisce di periopaper (ProFlow, Amityville, NY, USA) verranno premute delicatamente sulla ferita per 20 secondi. In caso di contaminazione del sangue, la striscia viene scaricata e il prelievo viene ripetuto dopo cinque minuti. Il volume dell'essudato viene registrato utilizzando un Peritron 8000 (Proflow) ed espresso in µL. Una striscia contiene circa 0,1-0,4 µL di essudato. Le strisce vengono quindi trasferite in provette di plastica e conservate a -80 fino a ulteriori analisi.

Raccolta di strisci batterici: verranno campionati quattro strisci batterici. Un tampone sterile verrà fatto passare attraverso il sito della ferita, posto in un tubo di plastica e conservato congelato a -80 °C fino a ulteriori analisi. Gli strisci saranno sottoposti a coltura microbica convenzionale per rilevare la presenza/assenza e la conta delle specie batteriche comunemente associate a ritardata guarigione delle ferite (streptococchi β-emolitici e S. aureus).

Percezione del dolore e del disagio: un registro di una pagina verrà consegnato ai partecipanti all'inizio di ogni periodo di rodaggio in modo che possano registrare l'assunzione di compresse e la propria percezione del dolore e del disagio secondo una scala VAS. Il partecipante è inoltre incoraggiato a registrare i fattori che potrebbero eventualmente influenzare il risultato (attività fisica e numero di bevande alcoliche). Al partecipante verrà chiesto di portare il registro compilato alla fine del periodo di intervento.

Stress percepito e salute generale: alla fine del periodo di intervento, al partecipante verrà chiesto di compilare il questionario generale sulla salute convalidato GHQ-12 (10) e la scala dello stress percepito convalidata (11). Questi fattori (auto-percezione dello stress e salute generale) sono noti per essere possibili cofondatori degli esiti della guarigione delle ferite.

Conformità: all'inizio di ogni periodo di intervento, ai partecipanti verranno fornite compresse sufficienti per 16 giorni e olio per uso topico sufficiente per nove giorni di applicazione. La conformità sarà verificata attraverso la compilazione da parte del partecipante di un registro in cui è registrata l'assunzione giornaliera di compresse e l'applicazione di olio. Per l'ultimo appuntamento, ai partecipanti verrà chiesto di portare le rimanenti compresse e l'olio per il conteggio/stima.

Analisi dei dati: tutti i dati saranno elaborati con il software statistico open source "R" e controllati per la normale distribuzione. L'analisi della varianza multivariata e univariata (MANOVA e ANOVA) verrà utilizzata per valutare il cambiamento all'interno del soggetto nel tempo. Un valore p inferiore a 0,05 sarà considerato statisticamente significativo. I risultati ottenuti saranno pubblicati su una rivista riconosciuta a livello internazionale. Se i risultati non possono essere pubblicati su una rivista, saranno disponibili sul sito web dell'Università dell'Istituto di Odontoiatria. Sottolineiamo che i risultati positivi, negativi e inconcludenti saranno pubblicati.

Gestione dei dati: tutti i dati raccolti saranno trattati nel rispetto della Legge sul Trattamento dei Dati Personali e della "Legge sulla Salute". All'atto dell'inclusione ai partecipanti verrà assegnato un numero univoco e un protocollo separato senza numero di identificazione personale. Questo studio non verrà segnalato a "Datatilsynet" in quanto si tratta di un progetto sanitario scientifico privato