Effekt av probiotika på oral sårheling - Pilotstudie (PROWOUND)

Intervensjon: etter informert samtykke og grunnlinjeinnsamling av kliniske data (alder, kjønn), vil deltakerne bli tilfeldig tilordnet en av behandlingsrekkefølgen. Som en innkjøringsperiode vil de få tilførsel av probiotiske eller placebotabletter nok i syv dager. Deltakerne blir bedt om å ta to tabletter daglig (en om morgenen og en om kvelden, dag 0-7) og blir bedt om å avstå fra annen mat eller kosttilskudd som inneholder probiotika. På dag åtte vil deltakeren oppsøke klinikkene og det vil bli utført en punchbiopsi. Avhengig av tildelingsgruppen vil probiotisk eller placeboolje bli levert. Deltakeren vil bli instruert om å påføre oljen lokalt på såret med en plastmikrobørste i 9 dager hver kveld, og sterkt forsterket til å fortsette med de tildelte tablettene to ganger daglig. Deltakeren vil delta på klinikkene på dag to, fem og åtte etter sår for oppfølgingsfotografier av sårheling. Den første intervensjonsperioden avsluttes med en utvaskingsperiode på fire uker, og deretter starter den andre innkjøringsperioden etter samme prosedyre.

De probiotiske tablettene og den probiotiske oljen (ved anbefalt dose) inneholder 2x10^8 CFU av Lactobacillus reuteri. Både placebotablettene og oljen er identiske i størrelse og sammensetning, men uten tilsetning av probiotiske stammer. Tablettene og oljen er pakket i identiske potter/flasker med fargekode. Koden vil bli oppbevart fra etterforskerne til analysen er ferdig. Både tablettene og oljen er levert av BIOGAIA AB.

Kliniske prosedyrer og prøvetaking

Alle kliniske prosedyrer og prøvesamlinger vil bli utført av en kvalifisert og autorisert tannlege fra Institutt for Odontologi, Seksjon for kariologi, endodonti, pediatrisk odontologi og klinisk genetikk, Fakultet for helse og medisinske vitenskaper, Københavns Universitet. Innsamlede prøver (spytt, såreksudat og bakterieutstryk) vil bli oppbevart i fryser ved -80 °C inntil alle prøver fra alle pasienter er samlet -i maksimalt seks måneder. Kjøring av alle innsamlede prøver samtidig gjør at laboratorieanalyser kan utføres effektivt og unngår feil.

Stansebiopsi: på dag åtte vil det ved hjelp av en biopsistans opprettes et standardisert sirkulært sår på 3,5 mm i diameter og ca. 1,5 mm dypt i slimhinnen i den harde ganen. Biopsien utføres under aseptiske forhold og lokalbedøvelse ved bruk av lidokain 2 % kombinert med epinefrin for lokal hemostase. En skalpell brukes til å fjerne overflateepitel og underliggende overfladisk bindevev, som vil bli kassert i henhold til biosikkerhetsforskrifter fra Institutt for odontologi, Københavns Universitet. Etter sår vil sårstedet bli fotografert (blindkodet) med et intraoralt kamera, og plasserer en standardstørrelse 6 mm diameter mal rundt såret som referanse. Deltakeren vil oppsøke tannklinikkene på dag to, fem og åtte etter såret for å få tatt et fotografi av såret av Ph.D-student Gina Castiblanco. Sårstørrelsen på fotografier vil bli målt av to vurderere og vil bli uttrykt som forholdet mellom såroverflatearealet i forhold til standard etikettstørrelse ved hjelp av programvare (Canvas 7, ACD Systems of America). Endepunktet vil være prosentandelen av initial sårstørrelse, målt på dag to, fem og åtte etter såret.

Spyttprøvetaking: seks prøver av ustimulert hel spytt (UWS) fra hvert forsøksperson vil bli samlet inn (en ved baseline, en rett etter innkjøringsperioden og en ved slutten av intervensjonsperioden). For USW-samling vil deltakeren sitte i en komfortabel stilling med hodet lett bøyd. Deltakeren blir bedt om å holde øynene åpne og gjøre så få bevegelser som mulig, inkludert svelging. Deretter blir han/hun bedt om å skylle munnen i vann og spytte den ut igjen. Deretter blir han/hun instruert om å la spytt strømme ut av munnen ned en bestemt plastkopp i ti minutter. Alikvoter av spytt (1,5 ml) vil umiddelbart bli plassert på is og lagret i en fryser ved -80 °C inntil videre analyse.

Innsamling av såreksudat: åtte prøver av såreksudat vil bli samlet inn totalt. Sårstedet vil bli tørket med bomullspellets og periopaper-strimler (ProFlow, Amityville, NY, USA) vil bli presset forsiktig på såret i 20 s. Ved blodkontaminering tømmes stripen og prøvetakingen gjentas etter fem min. Volumet av ekssudat registreres ved bruk av en Peritron 8000 (Proflow) og uttrykt i µL. En stripe rommer ca. 0,1-0,4 µL ekssudat. Strimlene overføres deretter til plastrør og lagres ved -80°C inntil videre analyse.

Bakterieutstryk: Det vil bli tatt prøver av fire bakterieutstryk. En steril vattpinne føres gjennom sårstedet, plasseres i et plastrør og oppbevares nedfryst ved -80 °C inntil videre analyse. Utstrykene vil bli utsatt for konvensjonell mikrobiell dyrking for å påvise tilstedeværelse/fravær og antall bakteriearter som vanligvis er assosiert med forsinket sårheling (β-hemolytiske streptokokker og S. aureus).

Oppfattelse av smerte og ubehag: En loggbok på én side vil bli overlevert deltakerne i begynnelsen av hver innkjøringsperiode slik at de kan registrere inntak av tabletter og egen oppfatning av smerte og ubehag etter en VAS-skala. Deltakeren oppfordres også til å registrere faktorer som muligens kan påvirke utfallet (fysisk aktivitet og antall alkoholholdige drikker). Deltakeren vil bli bedt om å ta med utfylt loggbok i slutten av intervensjonsperioden.

Opplevd stress og generell helse: i slutten av intervensjonsperioden vil deltakeren bli bedt om å fylle ut det validerte General Heath Questionnaire GHQ-12 (10) og den validerte Perceived Stress Scale (11). Disse faktorene (selvoppfatning av stress og generell helse) er kjent for å være mulige medstiftere av sårhelingsresultater.

Samsvar: i begynnelsen av hver intervensjonsperiode vil deltakerne få tabletter nok til 16 dager og olje til lokal bruk nok til ni dagers påføring. Samsvarskontroll vil bli kontrollert gjennom deltakerens utfylling av en loggbok der daglig inntak av tabletter og oljepåføring er registrert. Til siste avtale vil deltakerne bli bedt om å ta med resterende tabletter og olje for telling/estimering.

Dataanalyse: alle data vil bli behandlet med åpen kildekode-statistikkprogramvare "R" og kontrollert for normal distribusjon. Multivariat og univariat variansanalyse (MANOVAer og ANOVAer) vil bli brukt for å vurdere endring innen emne over tid. En p-verdi mindre enn 0,05 vil bli vurdert som statistisk signifikant. De oppnådde resultatene vil bli publisert i et internasjonalt anerkjent tidsskrift. Hvis resultatene ikke kan publiseres i et tidsskrift, vil de være tilgjengelige på nettstedet til University of the Odontology Institute. Vi legger vekt på at positive, negative og inkonklusive resultater vil bli publisert.

Databehandling: alle innsamlede data vil bli behandlet i samsvar med lov om behandling av personopplysninger og "Helseloven". Ved inkludering vil deltakerne bli tildelt et unikt nummer og en egen protokoll uten personnummer. Denne studien vil ikke bli rapportert til "Datatilsynet" da det er et privat vitenskapelig helseprosjekt