Wirkung von Probiotika auf die orale Wundheilung – Pilotstudie (PROWOUND)

Intervention: Nach informierter Zustimmung und Basiserfassung klinischer Daten (Alter, Geschlecht) werden die Teilnehmer nach dem Zufallsprinzip einer der Reihenfolge der Behandlungen zugeteilt. Als Anlaufphase erhalten sie einen Vorrat an probiotischen oder Placebo-Tabletten, die für sieben Tage ausreichen. Die Teilnehmer werden angewiesen, täglich zwei Tabletten einzunehmen (eine morgens und eine abends, Tage 0-7) und werden gebeten, auf alle anderen Lebensmittel oder Nahrungsergänzungsmittel zu verzichten, die Probiotika enthalten. Am achten Tag besucht der Teilnehmer die Kliniken und es wird eine Stanzbiopsie durchgeführt. Je nach Zuteilungsgruppe wird probiotisches oder Placebo-Öl zugeführt. Der Teilnehmer wird angewiesen, das Öl 9 Tage lang jeden Abend lokal auf die Wunde mit einer Kunststoff-Mikrobürste aufzutragen, und wird stark gestärkt, mit den zugewiesenen Tabletten zweimal täglich fortzufahren. Der Teilnehmer wird die Kliniken an den Tagen zwei, fünf und acht nach der Verwundung besuchen, um Nachsorgefotos der Wundheilung zu machen. Die erste Interventionsperiode endet mit einer Auswaschphase von vier Wochen, und dann beginnt die zweite Anlaufphase einer Interventionsperiode nach denselben Verfahren.

Die probiotischen Tabletten und das probiotische Öl (in der empfohlenen Dosis) enthalten 2x10^8 KBE Lactobacillus reuteri. Sowohl die Placebotabletten als auch das Öl sind in Größe und Zusammensetzung identisch, jedoch ohne die Zugabe der probiotischen Stämme. Die Tabletten und das Öl sind in identischen Tiegeln/Flaschen mit Farbcodierung verpackt. Der Code wird den Ermittlern vorenthalten, bis die Analyse abgeschlossen ist. Sowohl die Tabletten als auch das Öl werden von BIOGAIA AB bereitgestellt.

Klinische Verfahren und Probenahme

Alle klinischen Verfahren und Probenentnahmen werden von einem qualifizierten und autorisierten Zahnarzt des Instituts für Odontologie, Abteilung für Kariologie, Endodontie, Kinderzahnheilkunde und klinische Genetik, Fakultät für Gesundheits- und Medizinwissenschaften, Universität Kopenhagen durchgeführt. Gesammelte Proben (Speichel, Wundexsudat und Bakterienabstrich) werden in einem Gefrierschrank bei -80 °C gelagert, bis alle Proben von allen Patienten gesammelt sind – für maximal sechs Monate. Der gleichzeitige Ablauf aller gesammelten Proben ermöglicht eine effiziente Durchführung von Laboranalysen und vermeidet Fehler.

Stanzbiopsie: Am achten Tag wird mit Hilfe einer Biopsiestanze eine standardisierte kreisrunde Wunde von 3,5 mm Durchmesser und ca. 1,5 mm Tiefe in der Schleimhaut des harten Gaumens angelegt. Die Biopsie wird unter aseptischen Bedingungen und Lokalanästhesie unter Verwendung von Lidocain 2% in Kombination mit Epinephrin zur lokalen Hämostase durchgeführt. Ein Skalpell wird verwendet, um das Oberflächenepithel und das darunter liegende oberflächliche Bindegewebe zu entfernen, das gemäß den Biosicherheitsvorschriften des Instituts für Zahnmedizin der Universität Kopenhagen entsorgt wird. Nach der Verwundung wird die Wundstelle mit einer intraoralen Kamera fotografiert (blind kodiert), wobei eine Schablone in Standardgröße mit 6 mm Durchmesser als Referenz um die Wunde gelegt wird. Der Teilnehmer besucht die Zahnkliniken an den Tagen zwei, fünf und acht nach der Verwundung, um ein Foto der Wunde von der Doktorandin Gina Castiblanco machen zu lassen. Die Wundgröße auf Fotografien wird von zwei Ratern gemessen und wird als Verhältnis der Wundoberfläche relativ zur Standardetikettengröße mit Hilfe einer Software (Canvas 7, ACD Systems of America) ausgedrückt. Der Endpunkt ist der Prozentsatz der anfänglichen Wundgröße, gemessen an den Tagen zwei, fünf und acht nach der Wunde.

Speichelprobenahme: Sechs Proben von unstimuliertem Vollspeichel (UWS) von jedem Probanden werden gesammelt (eine zu Studienbeginn, eine direkt nach der Einlaufphase und eine am Ende der Interventionsphase). Für die USW-Sammlung sitzt der Teilnehmer in einer bequemen Position mit leicht gebeugtem Kopf. Der Teilnehmer wird gebeten, die Augen offen zu halten und so wenig Bewegungen wie möglich zu machen, einschließlich Schlucken. Dann wird er/sie gebeten, den Mund mit Wasser auszuspülen und wieder auszuspucken. Danach wird er/sie angewiesen, zehn Minuten lang Speichel aus dem Mund in einen dafür vorgesehenen Plastikbecher fließen zu lassen. Speichelaliquots (1,5 ml) werden sofort auf Eis gelegt und bis zur weiteren Analyse in einem Gefrierschrank bei -80 °C gelagert.

Sammlung von Wundexsudat: Insgesamt werden acht Proben Wundexsudat gesammelt. Die Wundstelle wird mit Wattepellets getrocknet und Periopaper-Streifen (ProFlow, Amityville, NY, USA) werden für 20 s sanft auf die Wunde gedrückt. Im Falle einer Blutkontamination wird der Streifen entsorgt und die Probenahme nach fünf Minuten wiederholt. Das Exsudatvolumen wird mit einem Peritron 8000 (Proflow) aufgezeichnet und in µL ausgedrückt. Ein Streifen enthält ungefähr 0,1-0,4 µL Exsudat. Die Streifen werden dann in Plastikröhrchen überführt und bis zur weiteren Analyse bei –80°C gelagert.

Bakterienabstrichentnahme: Es werden vier Bakterienabstriche entnommen. Ein steriler Tupfer wird durch die Wundstelle geführt, in ein Plastikröhrchen gegeben und bis zur weiteren Analyse bei -80 °C gefroren gelagert. Die Abstriche werden einer herkömmlichen mikrobiellen Kultivierung unterzogen, um das Vorhandensein/Fehlen und die Anzahl von Bakterienarten nachzuweisen, die üblicherweise mit einer verzögerten Wundheilung in Verbindung gebracht werden (β-hämolytische Streptokokken und S. aureus).

Schmerz- und Unbehagenempfinden: Zu Beginn jeder Einlaufphase wird den Teilnehmern ein einseitiges Logbuch ausgehändigt, in dem sie die Tabletteneinnahme und ihr eigenes Schmerz- und Unbehagenempfinden nach einer VAS-Skala erfassen können. Der Teilnehmer wird auch ermutigt, Faktoren zu registrieren, die das Ergebnis möglicherweise beeinflussen könnten (körperliche Aktivität und Anzahl alkoholischer Getränke). Der Teilnehmer wird gebeten, das ausgefüllte Logbuch am Ende des Interventionszeitraums mitzubringen.

Wahrgenommener Stress und allgemeiner Gesundheitszustand: Am Ende des Interventionszeitraums wird der Teilnehmer gebeten, den validierten allgemeinen Gesundheitsfragebogen GHQ-12 (10) und die validierte Stresswahrnehmungsskala (11) auszufüllen. Diese Faktoren (Selbstwahrnehmung von Stress und allgemeiner Gesundheitszustand) sind als mögliche Mitbegründer des Wundheilungsergebnisses bekannt.

Compliance: Zu Beginn jeder Interventionsperiode werden den Teilnehmern Tabletten für 16 Tage und Öl zur topischen Anwendung für neun Tage Anwendung zur Verfügung gestellt. Die Einhaltung wird durch das Ausfüllen eines Logbuches durch den Teilnehmer überprüft, in dem die tägliche Tabletteneinnahme und Ölanwendung eingetragen wird. Für den letzten Termin werden die Teilnehmer gebeten, die restlichen Tabletten und Öl zum Zählen/Schätzen mitzubringen.

Datenanalyse: Alle Daten werden mit der Open-Source-Statistiksoftware „R“ aufbereitet und auf Normalverteilung kontrolliert. Multivariate und univariate Varianzanalysen (MANOVAs und ANOVAs) werden verwendet, um die Veränderung innerhalb des Subjekts im Laufe der Zeit zu beurteilen. Ein p-Wert von weniger als 0,05 wird als statistisch signifikant angesehen. Die erzielten Ergebnisse werden in einer international anerkannten Zeitschrift veröffentlicht. Wenn die Ergebnisse nicht in einer Zeitschrift veröffentlicht werden können, werden sie auf der Website des Universitätsinstituts für Zahnheilkunde verfügbar sein. Wir legen Wert darauf, dass positive, negative und nicht schlüssige Ergebnisse veröffentlicht werden.

Datenverwaltung: Alle gesammelten Daten werden in Übereinstimmung mit dem Gesetz über die Verarbeitung personenbezogener Daten und dem „Gesundheitsgesetz“ behandelt. Bei der Aufnahme erhalten die Teilnehmer eine eindeutige Nummer und ein separates Protokoll ohne persönliche Identifikationsnummer. Diese Studie wird "Datatilsynet" nicht gemeldet, da es sich um ein privates wissenschaftliches Gesundheitsprojekt handelt