Влияние пробиотиков на заживление ран в полости рта — пилотное исследование (PROWOUND)

Вмешательство: после информированного согласия и исходного сбора клинических данных (возраст, пол) участники будут случайным образом распределены по одному из порядков лечения. В качестве вводного периода им будет выдан запас пробиотиков или таблеток плацебо в количестве, достаточном для семи дней. Участников просят принимать по две таблетки в день (одну утром и одну вечером, дни 0-7) и воздерживаться от любых других продуктов или добавок, содержащих пробиотики. На восьмой день участник посетит клинику, и будет выполнена пункционная биопсия. В зависимости от группы распределения будет поставляться масло с пробиотиком или плацебо. Участник будет проинструктирован наносить масло локально на рану с помощью пластиковой микрощетки в течение 9 дней каждый вечер, и ему будет настоятельно рекомендовано продолжать принимать назначенные таблетки два раза в день. Участник будет посещать клиники на второй, пятый и восьмой дни после ранения для последующих фотографий заживления ран. Первый период вмешательства заканчивается четырехнедельным периодом вымывания, а затем начинается второй вводной период вмешательства, следуя тем же процедурам.

Пробиотические таблетки и пробиотическое масло (в рекомендуемой дозе) содержат 2x10^8 КОЕ Lactobacillus reuteri. И таблетки плацебо, и масло идентичны по размеру и составу, но без добавления пробиотических штаммов. Таблетки и масло упакованы в одинаковые баночки/флаконы с цветовой маркировкой. Код будет скрыт от следователей до завершения анализа. И таблетки, и масло предоставлены BIOGAIA AB.

Клинические процедуры и отбор проб

Все клинические процедуры и сбор образцов будут проводиться квалифицированным и авторизованным стоматологом из Института одонтологии, отделения кариологии, эндодонтии, детской стоматологии и клинической генетики, факультета здравоохранения и медицинских наук Копенгагенского университета. Собранные образцы (слюна, раневой экссудат и бактериальный мазок) будут храниться в морозильной камере при температуре -80 °C до тех пор, пока не будут собраны все образцы от всех пациентов - максимум шесть месяцев. Запуск всех собранных проб одновременно позволяет эффективно проводить лабораторные анализы и избегать ошибок.

Пункционная биопсия: на восьмой день на слизистой оболочке твердого неба будет создана стандартная круглая рана диаметром 3,5 мм и глубиной примерно 1,5 мм с помощью биопсийного перфоратора. Биопсия выполняется в асептических условиях и под местной анестезией с использованием лидокаина 2% в сочетании с адреналином для местного гемостаза. Скальпель используется для удаления поверхностного эпителия и подлежащей поверхностной соединительной ткани, которые будут утилизированы в соответствии с правилами биобезопасности Института стоматологии Копенгагенского университета. После ранения место раны будет сфотографировано (вслепую закодировано) с помощью внутриротовой камеры, с размещением вокруг раны стандартного шаблона диаметром 6 мм в качестве эталона. Участник будет посещать стоматологические клиники на второй, пятый и восьмой дни после ранения, чтобы сфотографировать рану, сделанную аспиранткой Джиной Кастибланко. Размер раны на фотографиях измеряют двумя оценщиками и выражают как отношение площади поверхности раны к стандартному размеру этикетки с помощью программного обеспечения (Canvas 7, ACD Systems of America). Конечной точкой будет процент первоначального размера раны, измеренный на второй, пятый и восьмой дни после ранения.

Образцы слюны: будут взяты шесть образцов нестимулированной цельной слюны (UWS) у каждого субъекта (один на исходном уровне, один сразу после вводного периода и один в конце периода вмешательства). Для сбора USW участник будет сидеть в удобном положении со слегка наклоненной головой. Участника просят держать глаза открытыми и делать как можно меньше движений, включая глотание. Затем его просят прополоскать рот водой и снова выплюнуть. После этого ему/ей дают указание дать слюне вытечь изо рта в предназначенный для этого пластиковый стаканчик в течение десяти минут. Аликвоты слюны (1,5 мл) немедленно помещают на лед и хранят в морозильной камере при температуре -80 °C до дальнейшего анализа.

Сбор раневого экссудата: всего будет собрано восемь образцов раневого экссудата. Место раны высушивают ватными шариками, а полоски перио-бумаги (ProFlow, Amityville, NY, USA) аккуратно прижимают к ране на 20 с. В случае загрязнения кровью полоску выбрасывают, а забор проб повторяют через 5 мин. Объем экссудата регистрируют с помощью Peritron 8000 (Proflow) и выражают в мкл. Одна полоска вмещает примерно 0,1-0,4 мкл экссудата. Затем полоски переносят в пластиковые пробирки и хранят при -80 до дальнейшего анализа.

Сбор бактериального мазка: будут взяты четыре бактериальных мазка. Через место раны проводят стерильный тампон, помещают в пластиковую пробирку и хранят в замороженном виде при температуре -80 °C до дальнейшего анализа. Мазки подвергают обычному микробному культивированию для определения присутствия/отсутствия и подсчета видов бактерий, обычно связанных с замедленным заживлением ран (β-гемолитические стрептококки и S. aureus).

Восприятие боли и дискомфорта: в начале каждого вводного периода участникам будет выдаваться одностраничный журнал, чтобы они могли регистрировать прием таблеток и собственное восприятие боли и дискомфорта по шкале ВАШ. Участнику также предлагается зарегистрировать факторы, которые могут повлиять на результат (физическая активность и количество выпитых алкогольных напитков). Участнику будет предложено принести заполненный журнал в конце периода вмешательства.

Воспринимаемый стресс и общее состояние здоровья: в конце периода вмешательства участника попросят заполнить утвержденный опросник общего состояния здоровья GHQ-12 (10) и утвержденную шкалу воспринимаемого стресса (11). Известно, что эти факторы (самоощущение стресса и общее состояние здоровья) являются возможными соучредителями результатов заживления ран.

Соблюдение: в начале каждого периода вмешательства участникам будет предоставлено количество таблеток, достаточное для 16 дней, и масла для местного применения, достаточное для применения в течение девяти дней. Соответствие будет проверяться путем заполнения участником журнала, в котором регистрируется ежедневное потребление таблеток и применение масла. На последнюю встречу участников попросят принести оставшиеся таблетки и масло для подсчета/оценки.

Анализ данных: все данные будут обрабатываться с помощью статистического программного обеспечения с открытым исходным кодом «R» и контролироваться для нормального распределения. Многомерный и одномерный дисперсионный анализ (MANOVA и ANOVA) будет использоваться для оценки внутрисубъектных изменений с течением времени. Значение p менее 0,05 будет считаться статистически значимым. Полученные результаты будут опубликованы в международно признанном журнале. Если результаты не могут быть опубликованы в журнале, они будут доступны на сайте Института одонтологии Университета. Подчеркиваем, что будут опубликованы положительные, отрицательные и неубедительные результаты.

Управление данными: все собранные данные будут обрабатываться в соответствии с Законом об обработке персональных данных и «Законом о здравоохранении». При включении участникам будет присвоен уникальный номер и отдельный протокол без личного кода. Об этом исследовании не будет сообщено в «Дататилсинет», так как это частный научный проект в области здравоохранения.