墨西哥幼儿的强化牛奶、生长和微量营养素状况 (MilkGrowth)

该研究在墨西哥进行。 调查人员包括在日托中心就读的 12 至 30 个月大的儿童。 这些日托中心是国家政府计划的一部分，该计划的主要目标是支持职业母亲和那些打算工作但无法获得医疗服务并面临贫困风险的人。 该计划还包括负责照顾 12 至 36 个月大孩子的家庭的单亲父母。

此处描述的研究是一项随机、平行、双盲、对照试验，通过服用成长奶 (GM) 和强化奶 (FM) 进行。

随机化和掩蔽：

在这项双盲对照试验中，使用 Moses-Oakford 方法将 189 名儿童随机分配到 2 组中的 1 组，服用生长乳 (Enfa-Grow® GM) (GM) 和强化乳 (FM)。 红灰色组有96名儿童，蓝绿色组有93名儿童，在统计分析完成之前，研究将采用盲法。 一组接收 GM，另一组接收 FM。 两组均接受 480 mL/d（上午 7:00 为 240 mL，下午 16:00 为 240 mL）。 除了罐头的颜色编码外，这两种补充剂都没有区别，颜色、（白色奶粉）气味和味道都相同。 研究人员、现场工作人员、用户和分析师都不知道颜色代码。 在研究人员的监督下，每周 5 天为儿童提供牛奶，持续 4 个月，他们记录补充剂是否被消耗以及数量。

排除标准：

研究人员没有包括在研究期间接受母乳喂养的儿童，这两个儿童都没有接受多种微量营养素补充剂。 如果儿童的毛细血管血红蛋白 <9.0g/dl，在基线时或有临床疾病，则不包括在内。

数据收集 人体测量 在基线、8 周和 16 周时进行人体测量。 使用电子秤（TANITA Scale, Tanita Corp., Arlington Heights, IL capacity 14 kg for infants and 36 kg adults, Tokyo）测量体重，精确到 10g，使用长度板测量长度和高度，精确到毫米（ Schorr Industries，医学博士 Glenn Burney）。 使用柔性不可拉伸的塑化卷尺测量头围，精确到毫米（型号，Hoechstmass-Rollfix 150cm）。 根据协议使用标准技术对现场工作人员进行培训和标准化。 使用 2006 年世界卫生组织 (WHO) 参考标准将体重、身长和头围转换为 Z 分数。 发育迟缓、消瘦和体重不足的发生率是使用每个指标（年龄别身长或身高、身长别体重或身高和年龄别体重）在年龄和体重的特定截止点的负 2 z 分数来计算的性别。 超重/肥胖被定义为体重/身高以上加上 2 z 分数。

血红蛋白浓度是在通过手指刺破获得的毛细血管血样中测定的，并在基线时在便携式光度计-HemoCue-中测量。 根据选择标准，如果孩子 <9.0g/dl，则将孩子转诊到最近的健康中心。 禁食过夜后，在基线以及之后的 8 周和 16 周时从肘前静脉抽取静脉血样 (10ml)。 样本由一名训练有素的护士获得，该护士具有与儿童打交道的经验，并根据国家公共卫生研究所 (NIPH) 生物安全委员会制定的规程程序。 在每个日托中心采集毛细血管和静脉血样。 毛细血管血样仅在基线时采集。 一些母亲因为采血而退出了研究。 使用便携式离心机 EBA8（Hettich，图特林根，德国）以 280 X g 离心样品；原位 20 分钟，血清储存在彩色编码的低温小瓶中，并保存在避光的液氮中，直到运送到 NIPH 的生化和营养实验室。

一旦进入实验室，样品就被储存在 -70ºC 下，直到准备好进行分析。 每种微量营养素的测量如下： 铁蛋白、锌和叶酸：商业试剂盒用于评估铁蛋白的血清浓度（Dade Behring Inc.） 使用 Varian Vista Pro CCD 光谱仪通过电感耦合等离子体原子发射光谱法测量锌的血清浓度。 使用氢氧化钠、二硫苏糖醇和氰化钾从蛋白质中释放血清叶酸，并转化为氰钴胺素和稳定的叶酸。 它们的浓度是在 TOSOH 自动免疫分析中通过竞争性酶促免疫测定法测量的。 维生素 D：使用 Abbott Architect 模块通过 CMIA 分析血清 25-OH-D3。 维生素A：血清视黄醇用100%纯乙醇提取；在氮气通量下蒸发乙醇并溶解在100ml 10％乙醇中。 使用 3.9 x 150 mm 色谱柱 Nova-Pak C18 ODS（Waters Co.）和流动相，在 Waters 仪器（Waters Co., Milford, MA, USA）中通过高效液相色谱 (HPLC) 进行测定CH3OH，100%，流速为 1.5 ml/min，波长为 325 nm。 血清脂质：脂质血清谱由气相色谱仪（5890 Series II，惠普，美国）测定。每天在每个日托中心收集发病率数据。 使用清单记录腹泻和急性呼吸道感染的症状。 母亲或看护人被要求回忆与牛奶摄入有关的任何症状。

社会经济状况 有关参与者家庭特征、教育水平和父母职业的信息是通过采访母亲获得的。

干预 根据 WHO 和日托指南，每个工作日在每个日托中心准备和冲调奶粉。 早上大约早上 7 点，训练有素的工作人员根据分配给每个孩子的颜色编码准备牛奶。 瓶子被用来方便以毫升为单位进行测量。 每个瓶子在准备牛奶之前和之后在饮食测量秤（OHOUSE，型号 CS5000，容量 5000gx2g）中称重。还使用经过训练的杯子。 每个孩子都收到一个单独的瓶子或杯子，里面装有自己的牛奶（240 毫升）。 每个瓶子或杯子准备好后，就交给孩子。 孩子喝完牛奶后，将剩余的称重并记录在消费表中。 在每个孩子大约在下午 16:00 离开之前，根据协议再次准备牛奶 (240 毫升)。对剩余的牛奶进行称重、测量和记录。 指导母亲或看护人如何根据世卫组织指南在家准备奶粉。 这是在周末和在到达日托中心之前喝牛奶的儿童进行的。 在周末期间，母亲们获得了每天准备 480 毫升所需的牛奶量。 母亲们在消耗量表中记录了孩子剩余的牛奶量，并接受了估计和记录牛奶消耗量的培训。

微量营养素缺乏症的定义：

1. 叶酸：血清叶酸浓度低于 4ng/mL 的儿童被归类为缺乏。
2. 铁蛋白：血清浓度低于 12 μg/L (LIS) 的儿童。
3. 锌：血清浓度低于 65 μg/dL 的儿童。
4. 维生素 A：血清浓度低于 < 20.02 ug/dL (<0.70 µmol/l) 的儿童。
5. 维生素 D：血清浓度低于 20nmol/L（<8ng/ml）的儿童被认为严重缺乏。

统计分析 使用独立样本的 t 统计量比较研究组之间的基线一般特征。 对于分类特征，使用了卡方统计量。

对于每个连续响应变量 - 即 生长或微量营养素-，补充的差异效应是用多元回归模型估计的，该模型包括研究组的指​​标变量、随访期的指标变量以及这两项的相应交互作用。 对于二元结果，使用逻辑回归模型。 研究组之间显着不同的基线特征作为协变量包括在内。 所有标准误差都针对主题级别的数据依赖性进行了调整。 假定正态性分析人体测量连续响应，而假定微量营养素连续响应具有对数正态分布。 对于后者，在估计模型之前对结果变量进行对数变换，并获得调整后的几何均值作为后估计。 在拟合 logistic 模型并将 logit 函数的反函数应用于线性预测后，获得调整后的概率。 调整后的几何均值和概率是通过预测边际及其标准误差通过 Delta 方法获得的；这些预测边际随时间的变化作为平均边际效应获得。

从家庭物质特征和服务中提取第一主成分，获得了社会经济地位指标。 第一主成分解释了总方差的 30%。