Latte fortificato, crescita e stato dei micronutrienti nei bambini messicani (MilkGrowth)

Lo studio è stato condotto in Messico. Gli investigatori includevano bambini dai 12 ai 30 mesi di età che frequentavano asili nido. Questi asili nido fanno parte di un programma del governo nazionale il cui obiettivo principale è quello di sostenere le madri che lavorano e coloro che intendono lavorare e non hanno accesso a un servizio sanitario e sono a rischio di povertà. Il programma include anche genitori single a carico della propria famiglia con figli di età compresa tra i 12 ei 36 mesi.

Lo studio qui descritto è uno studio randomizzato, parallelo, in doppio cieco, controllato mediante somministrazione di latte di crescita (GM) e latte fortificato (FM).

Randomizzazione e mascheramento:

Il metodo Moses-Oakford è stato utilizzato per assegnare in modo casuale 189 bambini a 1 di 2 gruppi in questo studio controllato in doppio cieco mediante la somministrazione di latte di crescita (Enfa-Grow® GM) (GM) e latte fortificato (FM). C'erano 96 bambini nel gruppo rosso-grigio e 93 nel gruppo blu-verde, lo studio sarà in cieco fino al termine dell'analisi statistica. Un gruppo ha ricevuto GM e l'altro gruppo riceve FM. Entrambi i gruppi hanno ricevuto 480 ml/die (240 ml alle 7:00 e 240 ml alle 16:00). Entrambi i supplementi erano indistinguibili, stesso colore, odore (latte bianco in polvere) e sapore tranne che per il codice colore della lattina. Il codice colore era sconosciuto a ricercatori, operatori sul campo, utenti e analisti. Il latte è stato offerto ai bambini 5 giorni a settimana per un periodo di 4 mesi sotto la supervisione del personale dello studio che ha registrato se il supplemento è stato consumato e la quantità.

Criteri di esclusione:

I ricercatori non hanno incluso i bambini allattati al seno al momento dello studio, né i bambini che ricevevano supplementi multipli di micronutrienti. Se un bambino aveva un'emoglobina capillare <9,0 g/dl, al basale o era clinicamente malato non è stato incluso.

Raccolta dati Misure antropometriche Le misure antropometriche sono state prese al basale, 8 e 16 settimane. Il peso è stato misurato con l'approssimazione di 10 g con una bilancia elettronica (TANITA Scale, Tanita Corp., Arlington Heights, capacità IL 14 kg per neonati e 36 kg per adulti, Tokyo) e la lunghezza e l'altezza sono state misurate con l'approssimazione di un millimetro con una tavola di lunghezza ( Schorr Industries, Glenn Burney, MD). La circonferenza della testa è stata misurata con un metro a nastro plastificato flessibile non estensibile al millimetro più vicino (modello, Hoechstmass-Rollfix 150 cm). Gli operatori sul campo sono stati formati e standardizzati utilizzando tecniche standard secondo i protocolli. Peso, lunghezza e circonferenza cranica sono stati trasformati in punteggi Z utilizzando gli standard di riferimento dell'Organizzazione mondiale della sanità (OMS) del 2006. La prevalenza di arresto della crescita, deperimento e sottopeso è stata calcolata utilizzando meno 2 z-score per ciascun indicatore (lunghezza o altezza per età, peso per lunghezza o altezza e peso per età) a specifici punti limite per età e sesso. Sovrappeso/obesità sono stati definiti come peso per lunghezza/altezza sopra più 2 z-Score.

La concentrazione di emoglobina è stata determinata in campioni di sangue capillare ottenuti mediante puntura del dito e misurata in un fotometro portatile -HemoCue-, al basale. In base ai criteri di selezione, se un bambino aveva <9,0 g/dl, veniva indirizzato al centro sanitario più vicino. Dopo il digiuno notturno, sono stati prelevati campioni di sangue venoso (10 ml) dalla vena antecubitale al basale e dopo 8 e 16 settimane. I campioni sono stati prelevati da un'infermiera qualificata che aveva avuto esperienza di lavoro con i bambini e secondo le procedure del protocollo stabilite dalla Commissione per la biosicurezza presso l'Istituto nazionale di sanità pubblica (NIPH). In ogni centro diurno sono stati prelevati campioni di sangue capillare e venoso. I campioni di sangue capillare sono stati prelevati solo al basale. Alcune madri si stavano ritirando dallo studio a causa del prelievo di sangue. I campioni sono stati centrifugati utilizzando una centrifuga portatile EBA8 (Hettich, Tuttlingen, Germania) a 280 X g; 20 minuti in situ e il siero è stato conservato in fiale criogeniche con codice colore e conservato in azoto liquido protetto dalla luce fino alla consegna al Laboratorio di biochimica e nutrizione presso il NIPH.

Una volta in laboratorio, i campioni sono stati conservati a -70ºC fino al momento dell'analisi. Ogni micronutriente è stato misurato come segue: Ferritina, zinco e folato: sono stati utilizzati kit commerciali per valutare le concentrazioni sieriche di ferritina (Dade Behring Inc.) Le concentrazioni sieriche di zinco sono state misurate mediante spettroscopia di emissione atomica al plasma accoppiato induttivamente utilizzando uno spettrometro CCD Varian Vista Pro. Il folato sierico è stato rilasciato dalle proteine ​​utilizzando idrossido di sodio, ditiotreitolo e cianuro di potassio e trasformato in cianocobalamina e folati stabili. Le loro concentrazioni sono state misurate mediante saggi immunologici enzimatici competitivi in ​​un'analisi immunitaria automatizzata TOSOH. Vitamina D: il siero 25-OH-D3 è stato analizzato da CMIA utilizzando un modulo Abbott Architect. Vitamina A: il retinolo sierico è stato estratto con etanolo puro al 100%; l'etanolo è stato evaporato sotto flusso di azoto e sciolto in 100 mi di etanolo al 10%. Le determinazioni sono state eseguite mediante cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) in uno strumento Waters (Waters Co., Milford, MA, USA), utilizzando una colonna Nova-Pak C18 ODS (Waters Co.) da 3,9 x 150 mm, con una fase mobile di CH3OH, 100% con una velocità di flusso di 1,5 ml/min, alla lunghezza d'onda di 325 nm. Lipidi sierici: il profilo lipidico sierico è stato determinato da un gascromatografo (5890 Series II, Hewlett-Packard, Stati Uniti) I dati sulla morbilità sono stati raccolti giornalmente in ogni centro diurno. È stata utilizzata una lista di controllo per registrare i sintomi di diarrea e infezioni respiratorie acute. Alle madri o alle badanti è stato chiesto di ricordare eventuali sintomi relativi al consumo di latte.

Stato socioeconomico Le informazioni sulle caratteristiche della famiglia del partecipante, il livello di istruzione e l'occupazione dei genitori sono state ottenute intervistando la madre.

Intervento Il latte in polvere è stato preparato e ricostituito ogni giorno della settimana presso ogni asilo nido secondo le linee guida dell'OMS e dell'asilo nido. Al mattino, verso le 7, personale addestrato ha preparato il latte secondo il codice colore assegnato a ciascun bambino. Le bottiglie sono state utilizzate per facilitare la misurazione in millilitri. Ogni bottiglia è stata pesata prima e dopo la preparazione del latte in una bilancia per la misurazione della dieta (OHOUSE, modello CS5000, capacità 5000gx2g). Sono state utilizzate anche tazze addestrate. Ogni bambino ha ricevuto un biberon o una tazza individuale con il proprio latte (240ml). Una volta preparata ogni bottiglia o tazza, veniva data al bambino. Dopo che il bambino ha finito di bere il latte, gli avanzi sono stati pesati e registrati nel modulo di consumo. Il latte è stato nuovamente preparato (240 ml) secondo i protocolli prima che ogni bambino partisse approssimativamente alle 16:00 p.m. Il latte avanzato è stato pesato, misurato e registrato. Le madri o le badanti sono state istruite su come preparare il latte in polvere a casa secondo le linee guida dell'OMS. Questo veniva fatto nei fine settimana e per i bambini che bevevano latte prima di arrivare al centro diurno. Alle mamme veniva data la quantità di latte necessaria per preparare 480 ml al giorno durante il fine settimana. Le madri registravano la quantità di latte lasciata dal bambino in un modulo di consumo e venivano addestrate a stimare e registrare il consumo di latte.

Definizione di carenze di micronutrienti:

1. Folato: i bambini con concentrazioni sieriche di folato inferiori a < 4 ng/mL sono stati classificati come carenti.
2. Ferritina: bambini con concentrazioni sieriche inferiori a <12 μg/L (LIS).
3. Zinco: bambini con concentrazioni sieriche inferiori a <65 μg/dL.
4. Vitamina A: bambini con concentrazioni sieriche inferiori a <20,02 ug/dL (<0,70 µmol/l).
5. Vitamina D: i bambini con concentrazioni sieriche inferiori a <20 nmol/L (<8 ng/ml) sono stati considerati con grave carenza.

Analisi statistica Le caratteristiche generali di base sono state confrontate tra i gruppi di studio utilizzando la statistica t per campioni indipendenti. Per le caratteristiche categoriche è stata utilizzata la statistica chi quadrato.

Per ogni variabile di risposta continua - i.e. crescita o micronutrienti-, l'effetto differenziale dell'integrazione è stato stimato con un modello di regressione multipla che includeva una variabile indicatore del gruppo di studio, una variabile indicatore del periodo di follow-up e la corrispondente interazione di questi due termini. Per i risultati binari è stato utilizzato il modello di regressione logistica. Le caratteristiche di base che differivano significativamente tra i gruppi di studio sono state incluse come covariate. Tutti gli errori standard sono stati corretti per le dipendenze dei dati a livello di soggetto. Le risposte continue antropometriche sono state analizzate assumendo la normalità mentre si presumeva che le risposte continue dei micronutrienti avessero una distribuzione lognormale. Per quest'ultimo, la variabile di risultato è stata trasformata logaritmica prima di stimare il modello e sono state ottenute le medie geometriche corrette come post stima. Le probabilità aggiustate sono state ottenute dopo aver adattato i modelli logistici e aver applicato l'inverso della funzione logit alla previsione lineare. Le medie geometriche e le probabilità aggiustate sono state ottenute attraverso i margini predittivi ei loro errori standard attraverso il metodo Delta; le variazioni nel tempo di questi margini predittivi sono state ottenute come effetti marginali medi.

Un indicatore di stato socioeconomico è stato ottenuto astraendo la prima componente principale dalle caratteristiche materiali e dai servizi domestici. La prima componente principale ha spiegato il 30% della varianza totale.