Leite fortificado, crescimento e status de micronutrientes em crianças mexicanas (MilkGrowth)

O estudo foi realizado no México. Os investigadores incluíram crianças de 12 a 30 meses de idade que frequentavam creches. Estas creches fazem parte de um programa do governo nacional que tem como principal objetivo apoiar as mães trabalhadoras e aquelas que pretendem trabalhar e não têm acesso a um serviço de saúde e estão em risco de pobreza. O programa também inclui pais solteiros responsáveis ​​por sua família com filhos entre 12 e 36 meses de idade.

O estudo aqui descrito é um estudo randomizado, paralelo, duplo-cego, controlado pela administração de leite de crescimento (GM) e leite fortificado (FM).

Randomização e mascaramento:

O método de Moses-Oakford foi usado para atribuir aleatoriamente 189 crianças a 1 de 2 grupos neste estudo duplo-cego controlado pela administração de leite de crescimento (Enfa-Grow® GM) (GM) e leite fortificado (FM). Havia 96 crianças no grupo vermelho-cinza e 93 no grupo azul-verde, o estudo será cego até que a análise estatística seja concluída. Um grupo recebeu GM e o outro grupo recebeu FM. Ambos os grupos receberam 480 mL/dia (240 mL às 7h e 240 mL às 16h). Ambos os suplementos eram indistinguíveis, da mesma cor, odor (leite em pó branco) e sabor, exceto pelo código de cores da lata. O código de cores era desconhecido para pesquisadores, trabalhadores de campo, usuários e analistas. O leite foi oferecido às crianças 5 dias por semana por um período de 4 meses sob a supervisão do pessoal do estudo que registrou se o suplemento foi consumido, bem como a quantidade.

Critério de exclusão:

Os investigadores não incluíram crianças que foram amamentadas no momento do estudo, nem crianças que receberam suplementos múltiplos de micronutrientes. Se uma criança tinha hemoglobina capilar <9,0 g/dl, no início do estudo ou estava clinicamente doente, não foi incluída.

Coleta de dados Medidas antropométricas As medidas antropométricas foram tomadas no início, 8 e 16 semanas. O peso foi medido com precisão de 10g com uma balança eletrônica (TANITA Scale, Tanita Corp., Arlington Heights, IL capacidade de 14 kg para bebês e 36 kg para adultos, Tóquio) e o comprimento e a altura foram medidos até o milímetro mais próximo com uma tábua de comprimento ( Schorr Industries, Glenn Burney, MD). O perímetro cefálico foi medido com fita métrica plastificada flexível, inelástica, com precisão de milímetro (modelo Hoechstmass-Rollfix 150cm). Os trabalhadores de campo foram treinados e padronizados usando técnicas padrão de acordo com os protocolos. Peso, comprimento e perímetro cefálico foram transformados em escores Z usando os padrões de referência da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2006. A prevalência de baixa estatura, magreza e baixo peso foram calculadas usando menos 2 escores z para cada indicador (comprimento ou altura para idade, peso para comprimento ou altura e peso para idade) em pontos de corte específicos para idade e sexo. O sobrepeso/obesidade foi definido como peso para comprimento/altura acima mais 2 z-Score.

A concentração de hemoglobina foi determinada em amostras de sangue capilar obtidas por picada no dedo e medidas em Fotômetro Portátil -HemoCue-, na linha de base. De acordo com os critérios de seleção, se uma criança tivesse <9,0g/dl, a criança era encaminhada ao posto de saúde mais próximo. Após jejum noturno, amostras de sangue venoso (10ml) foram coletadas da veia antecubital no início e 8 e 16 semanas depois. As amostras foram obtidas por uma enfermeira treinada com experiência em trabalhar com crianças e de acordo com os procedimentos protocolares estabelecidos pela Comissão de Biossegurança do Instituto Nacional de Saúde Pública (NIPH). Amostras de sangue capilar e venoso foram coletadas em cada creche. Amostras de sangue capilar foram coletadas apenas no início do estudo. Algumas mães estavam saindo do estudo por causa da coleta de sangue. As amostras foram centrifugadas usando uma centrífuga portátil EBA8 (Hettich, Tuttlingen, Alemanha) a 280 X g; 20 min in situ e o soro foi armazenado em frascos criogênicos codificados por cores e preservados em nitrogênio líquido protegido da luz até a entrega ao Laboratório de Bioquímica e Nutrição do NIPH.

Uma vez no laboratório, as amostras foram armazenadas a -70ºC até estarem prontas para serem analisadas. Cada micronutriente foi medido da seguinte forma: Ferritina, zinco e folato: Foram usados ​​kits comerciais para avaliar as concentrações séricas de ferritina (Dade Behring Inc.) As concentrações séricas de zinco foram medidas por espectroscopia de emissão atômica de plasma acoplado indutivamente usando um espectrômetro Varian Vista Pro CCD. O folato sérico foi liberado da proteína usando hidróxido de sódio, ditiotreitol e cianeto de potássio e transformado em cianocobalamina e folatos estáveis. Suas concentrações foram medidas por imunoensaios enzimáticos competitivos em uma imunoanálise automatizada TOSOH. Vitamina D: soro 25-OH-D3 foi analisado por CMIA usando um módulo Abbott Architect. Vitamina A: O retinol sérico foi extraído com etanol 100% puro; o etanol foi evaporado sob um fluxo de azoto e dissolvido em 100 ml de etanol a 10%. As determinações foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) em um instrumento Waters (Waters Co., Milford, MA, EUA), usando uma coluna de 3,9 x 150 mm Nova-Pak C18 ODS (Waters Co.), com uma fase móvel de CH3OH, 100% com uma velocidade de fluxo de 1,5 ml/min, em um comprimento de onda de 325 nm. Lipídios séricos: o perfil lipídico sérico foi determinado por um cromatógrafo a gás (5890 Série II, Hewlett-Packard, Estados Unidos). Os dados de morbidade foram coletados diariamente em cada creche. Uma lista de verificação foi usada para registrar sintomas de diarreia e infecções respiratórias agudas. As mães ou cuidadores foram solicitados a relatar quaisquer sintomas relacionados ao consumo de leite.

Situação socioeconômica As informações sobre as características do domicílio do participante, o nível de escolaridade e a ocupação dos pais foram obtidas por meio de entrevista com a mãe.

Intervenção O leite em pó foi preparado e reconstituído todos os dias da semana em cada creche de acordo com as orientações da OMS e da Creche. Pela manhã, aproximadamente às 7h, pessoal treinado preparou o leite de acordo com o código de cores atribuído a cada criança. Garrafas foram usadas para facilitar a medição em mililitros. Cada mamadeira foi pesada antes e após o preparo do leite em balança dietética (OHOUSE, modelo CS5000, capacidade 5000gx2g). Também foram utilizados copos treinados. Cada criança recebeu uma mamadeira ou copo individual com seu próprio leite (240ml). Uma vez que cada mamadeira ou copo foi preparado, foi dado à criança. Após a criança terminar de beber o leite, as sobras foram pesadas e registradas na ficha de consumo. O leite foi preparado novamente (240ml) de acordo com os protocolos antes de cada criança sair aproximadamente às 16h. O leite restante foi pesado, medido e registrado. As mães ou cuidadores foram instruídos sobre como preparar o leite em pó em casa de acordo com as orientações da OMS. Isso era feito nos finais de semana e para as crianças que bebiam leite antes de chegar à creche. As mães receberam a quantidade de leite necessária para preparar 480 ml por dia durante o fim de semana. As mães registraram a quantidade de leite deixada pela criança em uma ficha de consumo e foram treinadas para estimar e registrar o consumo de leite.

Definição de deficiências de micronutrientes:

1. Folato: Crianças com concentrações séricas de folato abaixo de < 4ng/mL foram categorizadas como deficientes.
2. Ferritina: Crianças com concentrações séricas abaixo de <12 μg/L (LIS).
3. Zinco: Crianças com concentrações séricas abaixo de <65 μg/dL.
4. Vitamina A: Crianças com concentrações séricas abaixo de < 20,02 ug/dL (<0,70 µmol/l).
5. Vitamina D: Crianças com concentrações séricas abaixo de < 20nmol/L (<8ng/ml) foram consideradas com deficiência grave.

Análise estatística As características gerais iniciais foram comparadas entre os grupos de estudo usando a estatística t para amostras independentes. Para as características categóricas foi utilizada a estatística qui-quadrado.

Para cada variável de resposta contínua - ou seja, crescimento ou micronutrientes-, o efeito diferencial da suplementação foi estimado com um modelo de regressão múltipla que incluiu uma variável indicadora do grupo de estudo, uma variável indicadora do período de acompanhamento e a correspondente interação desses dois termos. Para os resultados binários foi utilizado o modelo de regressão logística. As características basais que diferiram significativamente entre os grupos de estudo foram incluídas como covariáveis. Todos os erros padrão foram ajustados para dependências de dados no nível do assunto. As respostas antropométricas contínuas foram analisadas assumindo normalidade, enquanto as respostas contínuas de micronutrientes foram assumidas como tendo uma distribuição lognormal. Para o último, a variável de resultado foi transformada em logaritmo antes de estimar o modelo e as médias geométricas ajustadas foram obtidas como pós-estimação. As probabilidades ajustadas foram obtidas após o ajuste dos modelos logísticos e aplicação do inverso da função logit à predição linear. Médias geométricas ajustadas e probabilidades foram obtidas por meio de margens preditivas e seus erros padrão pelo método Delta; as mudanças ao longo do tempo para essas margens preditivas foram obtidas como efeitos marginais médios.

Um indicador de status socioeconômico foi obtido abstraindo o primeiro componente principal das características materiais e serviços do domicílio. O primeiro componente principal explicou 30% da variância total.