Imunologické účinky intranazálních chitinových mikročástic (INCA)

SYNOPSE STUDIA Cíle

Hlavní

•Posoudit účinky intranazálního dávkování chitinových mikročástic na odpovědi nosní sliznice s ohledem na koncentraci cytokinů (TNF-alfa, IFN-gama, IL-1b, IL-4 IL5, IL, 6, IL-8, IL-10 a IL-13) ve výplachu nosu ve srovnání s dávkováním placeba.

Sekundární

• Zhodnotit účinky intranazálního dávkování chitinových mikročástic na odpovědi nosní sliznice s ohledem na koncentraci cytokinů (TNF-alfa, IFN-gama, IL-1b, IL-4 IL5, IL, 6, IL-8, IL -10 a IL-13) v tekutině z výplachu nosu ve srovnání s dávkováním s aktivní kontrolou.
• Stanovit celkový počet eozinofilů a koncentraci cysteinyl leukotrienu v tekutině z nazální laváže 4 a 8 hodin po podání dávky ve srovnání s podáním před podáním dávky.
• K posouzení celkového skóre nosních symptomů 4 a 8 hodin po podání dávky.
• Posoudit bezpečnost a snášenlivost chitinových mikročástic podávaných intranazálně.

Studovat design

Tato studie je jednodávková, dvojitě zaslepená placeba a jednoduše zaslepená aktivní kontrolovaná 3-dobá zkřížená zkřížená studie s 2týdenním vymýváním mezi každou léčbou. Subjekty budou rozděleny do 2 skupin pro studii a randomizovány tak, aby dostávaly jednu dávku buď intranazálních chitinových mikročástic nebo placeba během prvních dvou období a jednu dávku aktivního kontrolního produktu, lipopolysacharidu (LPS), pro třetí třetina. Léčba pro první dvě periody bude dvojitě zaslepená a léčba pro třetí periodu LPS bude jednoduše zaslepená.

Každá aplikace jednotlivé dávky chitinových mikročástic (cmp), placeba a aktivního kontrolního výrobku, LPS, má zahrnovat dva 0,1 ml odměřené spreje do každé nosní dírky. Celkový objem spreje pro každou aplikaci je 0,4 ml ekvivalentní celkové jednotlivé dávce pro chitin 2 mg (0,5 mg na 0,1 ml sprej) a celkové jednotlivé dávce pro LPS ve výši 2 mg endotoxinu z Enterobacter agglomerans (0,5 mg na 0,1 ml spreje).

Klimatická komora, kde se má provádět dávkování, bude běžet při 22 °C s 3,5-4 výměnami vzduchu za hodinu s čistým vzduchem filtrovaným HEPA při relativní vlhkosti (RH) 35-40 %

Studijní populace

Studie bude zahrnovat 12 zdravých subjektů splňujících kritéria pro zařazení, randomizovaných do léčby. Délka účasti každého subjektu bude cca 42 dní s osmi návštěvami včetně screeningu a bezpečnostního sledování.

Plán a metody léčby Studie má zahrnovat tři zkřížená léčebná období, kdy každý subjekt (celkem 12) bude dostávat jednotlivé dávky cmp, placeba nebo LPS (aktivní kontrola) v každém ze tří léčebných období. Studie byla navržena tak, že LPS má být dávkován v posledním období, aby se zmírnily případné problémy s přenosem.

Screening má probíhat v období cca 2-6 týdnů před podáním dávky. Po získání informovaného souhlasu se každý subjekt podrobí screeningové návštěvě za účelem přezkoumání kritérií pro zařazení/vyloučení a potvrzení způsobilosti. Každý subjekt bude poté zařazen do jedné ze dvou dávkových skupin (6 subjektů na skupinu) pro každé ze tří studijních období za účelem koordinace dávkování na klinice. Počáteční screening identifikuje 4-8 dalších subjektů (celkem až 20 screenovaných), kteří budou zahrnuti pouze v případě, že jeden z původně randomizovaných subjektů vypadne ze studie. Subjekty, které jsou nahrazeny, budou randomizovány k léčbě a budou muset podstoupit všechna tři období léčby.

Pro období 1, v den 0, bude první dávkovači skupina randomizována tak, aby dostávala buď cmp nebo placebo. Subjekty budou přijaty na kliniku v 8:30, aby se aklimatizovaly, obdržely klinické hodnocení před podáním dávky a potvrdily způsobilost. Dávkování má začít v 10:00 hodin a hodnocení se provádí v souladu s postupy definovanými níže. Subjekty zůstanou na klinice do c. 20:00h. Následující den (den 1) obdrží stejné subjekty bezpečnostní následný telefonický rozhovor. V den 2 bude druhá dávkovači skupina randomizována tak, aby dostávala buď CMP nebo placebo, přičemž další den (den 3) opět obdrží telefonický rozhovor o bezpečnosti. Po dobu 2, 14. den, bude první dávkovači skupina dostávat dávku, která nebyla dříve přidělena, buď CMP nebo placebo, a následující den (den 15) obdrží telefonický rozhovor o bezpečnosti. V den 16 obdrží druhá dávková skupina také dávku, která nebyla dříve přiřazena, buď CMP nebo placebo, a znovu obdrží telefonický rozhovor o bezpečnosti následující den (den 17). Po dobu 3 bude LPS podáván první dávkovači skupině v den 28 a druhé dávkovači skupině v den 30; s následným bezpečnostním telefonickým rozhovorem ve dnech 29 a 31.

Po poslední dávkovači návštěvě obdrží subjekty hodnocení bezpečnosti na konci studie prostřednictvím telefonického rozhovoru v den 42 (+/- 2 dny), které bude zahrnovat kontroly nežádoucích účinků.

Každý subjekt bude muset poskytnout 10 ml krve pro hematologické hodnocení při screeningu a v léčebných obdobích 1, 2 a 3. Celkem bude každému subjektu odebráno 40 ml krve po celou dobu trvání studie.

Předdávkování

1. Hodnocení bezpečnosti z hlediska fyzikálního vyšetření, včetně úst, nosu a plic
2. Dotazník symptomů
3. Odebraná krev na hematologická vyšetření

4. Provede se výplach nosu nazálním olivovým testem s osobami sedícími s hlavou nakloněnou dopředu po dobu 60 sekund

   Po dávkování

5. Měření skóre nosních příznaků po 4 a 8 hodinách
6. Akustická rinometrická zkouška provedena ve 4 a 8 hodinách
7. Výplach nosu nazálním olivovým testem s osobami sedícími s hlavou předkloněnou po dobu 60 sekund prováděný ve 4 a 8 hodinách
8. Symptomatický dotazník byl proveden ve 4 a 8 hodinách
9. Monitorování bezpečnosti: vitální funkce, srdeční frekvence, krevní tlak prováděné po 2, 6 hodinách
10. Následný bezpečnostní rozhovor provedený 24 hodin po podání dávky (následující den), který zahrnuje záznam nežádoucích účinků a kontrolu současné medikace.

Primární koncový bod Změny hladin (maximální koncentrace) TNF-alfa, IFN-gama, IL-1b, IL-4, IL5, IL-6, IL-8, IL-10 a IL-13 ve vzorcích nosní laváže po intranazální dávkování s cmp ve srovnání s placebem.

Sekundární koncový bod Změny hladin (maximální koncentrace) TNF-alfa, IFN-gama, IL-1b, IL-4, IL5, IL-6, IL-8, IL-10 a IL-13 ve vzorcích nosní laváže po intranazální aplikaci dávkování s cmp ve srovnání s lipopolysacharidovou aktivní kontrolou.

Změna od základní linie:

1. celkový počet eozinofilů a koncentrace cysteinyl leukotrienu v tekutině z nosní laváže po intranazálním podání cmp
2. celkové skóre nosních symptomů za 4 a 8 hodin po intranazálním podání cmp

Bezpečnost bude hodnocena pomocí nežádoucích příhod, vitálních funkcí a nosní akustické rinometrie po dávkování cmp oproti placebu.

Statistické hodnocení Pro cytokiny a počty buněk se měří koncentrace a logaritmicky transformovaná data se analyzují pomocí modelu ANOVA včetně dne studie a expozice jako fixního faktoru a účastníků jako náhodného faktoru. Tyto proměnné jsou popsány geometrickým průměrem, variačním koeficientem (CV), relativním rozdílem mezi expozicemi včetně 95% intervalu spolehlivosti (CI) a p-hodnotou.

Kvůli problémům se stropem a podlahou v datech, heterogenitě variací (v rámci účastníka) nebo porušení předpokladu normálně rozdělených dat není vhodné analyzovat všechna data výsledků, jako je skóre symptomů (změna od výchozí hodnoty) s ANOVA. Zde budou aplikovány neparametrické testy. K porovnání skupin bude použit test Wilcoxon Rank sum.

Subjektivní symptomy na začátku jsou popsány mediánem a interkvartilním rozmezím. Údaje pro „změnu nosního skóre“ jsou popsány pomocí krabicových grafů. Horní sousední hodnota v grafech je největší datový bod menší než 75. percentil plus 3/2 násobek mezikvartilového rozmezí. Dolní sousední hodnota je definována podobným způsobem.

Pro srovnání placeba a expozice cmp a při zohlednění možného „efektu učení“ budou data analyzována standardní technikou s přihlédnutím k designu (cross-over). Účastníci budou rozděleni do dvou skupin kvůli dvěma možným pořadím vystavení; jedna skupina sestávající z účastníků, kteří byli vystaveni působení placeba před expozicí cmp; a další skupina účastníků, kteří byli vystaveni cmp před expozicí placebu. Hypotéza žádného rozdílu mezi expozicí cmp a placebem bude testována porovnáním dvou skupin s ohledem na rozdíly mezi prvním a druhým měřením. K porovnání těchto dvou skupin se používá test Wilcoxon Rank sum. Podobným způsobem budeme testovat hypotézu „žádný efekt učení“.