Effetti immunologici delle microparticelle intranasali di chitina (INCA)

SINOSSI DELLO STUDIO Obiettivi

Primario

• Valutare gli effetti della somministrazione intranasale di microparticelle di chitina sulle risposte della mucosa nasale rispetto alla concentrazione di citochine (TNF-alfa, IFN-gamma, IL-1b, IL-4 IL5, IL, 6, IL-8, IL-10 e IL-13) nel liquido di lavaggio nasale rispetto al dosaggio con placebo.

Secondario

• Valutare gli effetti della somministrazione intranasale di microparticelle di chitina sulle risposte della mucosa nasale rispetto alla concentrazione di citochine (TNF-alfa, IFN-gamma, IL-1b, IL-4 IL5, IL, 6, IL-8, IL -10 e IL-13) nel fluido di lavaggio nasale rispetto al dosaggio con controllo attivo.
• Per valutare la conta totale degli eosinofili e la concentrazione di cisteinil leucotriene nel fluido di lavaggio nasale a 4 e 8 ore dopo la somministrazione rispetto alla pre-somministrazione.
• Per valutare i punteggi totali dei sintomi nasali a 4 e 8 ore dopo la somministrazione.
• Valutare la sicurezza e la tollerabilità delle microparticelle di chitina dosate per via intranasale.

Progettazione dello studio

Questo studio è uno studio cross-over a dose singola, in doppio cieco con placebo e controllo attivo in singolo cieco di 3 periodi con un periodo di sospensione di 2 settimane tra ogni trattamento. I soggetti saranno divisi in 2 gruppi per lo studio e randomizzati per ricevere una singola dose di microparticelle di chitina intranasale o placebo per i primi due periodi e una singola dose di un articolo di controllo attivo, lipopolisaccaride (LPS), per il terzo periodo. Il trattamento per i primi due periodi sarà in doppio cieco e il trattamento per il terzo periodo con LPS sarà in singolo cieco.

Ogni applicazione a dose singola per le microparticelle di chitina (cmp), il placebo e l'articolo di controllo attivo, LPS, deve comprendere due spruzzi dosati da 0,1 ml in ciascuna narice. Il volume totale dello spray per ciascuna applicazione è di 0,4 ml equivalente a una singola dose totale per chitina di 2 mg (0,5 mg per 0,1 ml spray) e una singola dose totale per LPS, di 2 mg di endotossina da Enterobacter agglomerans (0,5 mg per spruzzo da 0,1 ml).

La camera climatica in cui deve essere eseguito il dosaggio funzionerà a 22°C con 3,5-4 ricambi d'aria all'ora con aria pulita filtrata HEPA a un'umidità relativa (RH) del 35-40%

Popolazione di studio

Lo studio coinvolgerà 12 soggetti sani conformi ai criteri di inclusione randomizzati ai trattamenti. La durata della partecipazione di ciascun soggetto sarà di circa 42 giorni con otto visite inclusi screening e follow-up sulla sicurezza.

Piano e metodi di trattamento Lo studio comprenderà tre periodi di trattamento incrociato, in cui ciascun soggetto (12 in totale) riceverà dosi singole di cmp, placebo o LPS (controllo attivo) in ciascuno dei tre periodi di trattamento. Lo studio è stato progettato in modo tale che l'LPS debba essere dosato nell'ultimo periodo in modo da mitigare eventuali problemi con il carry-over.

Lo screening deve avvenire in un periodo di circa 2-6 settimane prima della somministrazione. Dopo aver ottenuto il consenso informato, ciascun soggetto verrà sottoposto a una visita di screening al fine di rivedere i criteri di inclusione/esclusione e confermare l'idoneità. Ogni soggetto verrà quindi assegnato a uno dei due gruppi di dosaggio (6 soggetti per gruppo) per ciascuno dei tre periodi di studio al fine di coordinare il dosaggio presso la Clinica. Lo screening iniziale identificherà 4-8 soggetti aggiuntivi (in totale fino a 20 sottoposti a screening) che verranno inclusi solo se uno dei soggetti originariamente randomizzati abbandona lo studio. I soggetti che vengono sostituiti saranno randomizzati per il trattamento e dovranno sottoporsi a tutti e tre i periodi di trattamento.

Per il periodo 1, il giorno 0, il primo gruppo di dosaggio sarà randomizzato per ricevere cmp o placebo. I soggetti saranno ammessi alla clinica alle 8:30 per acclimatarsi, ricevere una valutazione clinica pre-dosaggio e confermare l'idoneità. Il dosaggio deve iniziare alle 10:00 con valutazione condotta secondo le procedure definite di seguito. I soggetti rimarranno in Clinica fino al c. 20:00. Il giorno successivo (giorno 1), gli stessi soggetti riceveranno un colloquio telefonico di follow-up sulla sicurezza. Il giorno 2, il secondo gruppo di dosaggio verrà randomizzato per ricevere cmp o placebo, ricevendo nuovamente un follow-up sulla sicurezza dell'intervista telefonica il giorno successivo (giorno 3). Per il periodo 2, il giorno 14, il primo gruppo di dosaggio riceverà la dose non assegnata in precedenza, cmp o placebo e riceverà un follow-up sulla sicurezza tramite intervista telefonica il giorno successivo (giorno 15). Il giorno 16, il secondo gruppo di dosaggio riceverà anche la dose non assegnata in precedenza, cmp o placebo e riceverà nuovamente un follow-up sulla sicurezza dell'intervista telefonica il giorno successivo (giorno 17). Per il periodo 3, LPS verrà somministrato al primo gruppo di dosaggio il giorno 28 e al secondo gruppo di dosaggio il giorno 30; con un follow-up sulla sicurezza del colloquio telefonico nei giorni 29 e 31 rispettivamente.

Dopo l'ultima visita di dosaggio, i soggetti riceveranno una valutazione della sicurezza di fine studio tramite colloquio telefonico il giorno 42 (+/- 2 giorni), che includerà controlli sugli eventi avversi.

Ogni soggetto dovrà fornire 10 ml di sangue per la valutazione ematologica allo screening e ai periodi di trattamento 1, 2 e 3. Verranno prelevati in totale 40 ml di sangue per ogni soggetto per l'intera durata dello studio.

Predosaggio

1. Valutazione della sicurezza in termini di esame fisico, inclusi bocca, naso e polmoni
2. Questionario sui sintomi
3. Prelievo di sangue per esami ematologici

4. Viene eseguito il lavaggio nasale mediante il test dell'oliva nasale con le persone sedute con la testa piegata in avanti per 60 secondi

   Post-dosaggio

5. Misurazione dei punteggi dei sintomi nasali a 4 e 8 ore
6. Test di rinometria acustica eseguito a 4 e 8 ore
7. Lavaggio nasale mediante il test dell'oliva nasale con le persone sedute con la testa piegata in avanti per 60 secondi eseguito a 4 e 8 ore
8. Questionario sui sintomi eseguito a 4 e 8 ore
9. Monitoraggio della sicurezza: segni vitali, frequenza cardiaca, pressione arteriosa eseguiti a 2, 6 ore
10. Intervista sulla sicurezza di follow-up eseguita 24 ore dopo la somministrazione (giorno successivo) che include la registrazione degli eventi avversi e il controllo concomitante del farmaco.

Endpoint primario Variazioni dei livelli (concentrazione massima) di TNF-alfa, IFN-gamma, IL-1b, IL-4, IL5, IL-6, IL-8, IL-10 e IL-13 in campioni di lavaggio nasale a seguito dosaggio intranasale con cmp rispetto al placebo.

Endpoint secondario Variazioni dei livelli (concentrazione massima) di TNF-alfa, IFN-gamma, IL-1b, IL-4, IL5, IL-6, IL-8 IL-10 e IL-13 in campioni di lavaggio nasale dopo intranasale dosaggio con cmp rispetto al controllo attivo lipopolisaccaridico.

Variazione rispetto al basale:

1. la conta totale degli eosinofili e la concentrazione di cisteinil leucotrieni nel fluido di lavaggio nasale dopo somministrazione intranasale con cmp
2. punteggi totali dei sintomi nasali a 4 e 8 ore dopo la somministrazione intranasale di cmp

La sicurezza sarà valutata utilizzando gli eventi avversi, i segni vitali e la rinometria acustica nasale dopo la somministrazione di cmp rispetto al placebo.

Valutazione statistica Per le citochine e la conta cellulare vengono misurate le concentrazioni ei dati trasformati in log analizzati con un modello ANOVA che include il giorno dello studio e l'esposizione come fattore fisso ei partecipanti come fattore casuale. Queste variabili sono descritte dalla media geometrica, dal coefficiente di varianza (CV), dalla differenza relativa tra le esposizioni compreso l'intervallo di confidenza al 95% (CI) e dal valore p.

A causa di problemi di massimale e di base nei dati, eterogeneità nella variazione (all'interno del partecipante) o violazioni dell'assunzione di dati normalmente distribuiti, non è appropriato analizzare tutti i dati degli esiti come i punteggi dei sintomi (variazione rispetto al basale) con ANOVA. Qui verranno applicati test non parametrici. Verrà utilizzato un test della somma dei ranghi di Wilcoxon per confrontare i gruppi.

I sintomi soggettivi al basale sono descritti dalla mediana e dall'intervallo inter quartile. I dati per la "variazione dei punteggi nasali" sono descritti da grafici a scatola. Il valore adiacente superiore nei grafici è il punto dati più grande inferiore al 75° percentile più 3/2 volte l'intervallo interquartile. Il valore adiacente inferiore è definito in modo simile.

Per confrontare il placebo e l'esposizione al cmp e tenendo conto di un possibile 'effetto di apprendimento' i dati saranno analizzati con una tecnica standard tenendo conto del design (cross-over). I partecipanti saranno divisi in due gruppi in ragione dei due possibili ordini di esposizione; un gruppo composto da partecipanti che sono stati esposti all'esposizione al placebo prima dell'esposizione al cmp; e un altro gruppo di partecipanti che sono stati esposti a cmp prima dell'esposizione al placebo. L'ipotesi di nessuna differenza tra esposizione a cmp e placebo sarà verificata confrontando i due gruppi rispetto alle differenze tra la prima e la seconda misurazione. Un test di somma Wilcoxon Rank viene utilizzato per confrontare i due gruppi. In modo simile verificheremo l'ipotesi di 'nessun effetto dell'apprendimento'.