Asociace mezi funkcemi HDL a aterosklerotickou zátěží u zdravých jedinců

Výběr: Účastníci studie jsou zpočátku vybíráni prostřednictvím vyhodnocení po sobě jdoucích profilů lipidů od jedinců, kteří spontánně vyhledávají vládní centra primární péče ve městě Campinas, Sao Paulo, Brazílie. Provádějí se telefonické screeningové rozhovory, po nichž následuje osobní klinické hodnocení a krevní vyšetření.

Biochemické analýzy: Glukóza, triglyceridy, HDL-C a c-reaktivní protein (CRP) jsou měřeny v automatickém modulu Modular® Analytics Evo (Roche Diagnostics, Burgess Hill, West Sussex, Velká Británie) pomocí činidel Roche Diagnostics® (Mannheim, Německo) . LDL-cholesterol se vypočítá podle Friedewaldova vzorce. Hladiny inzulínu v séru se měří pomocí ELISA (Millipore, Massachusetts, USA). K odhadu citlivosti na inzulín se používá kalkulačka Homeostasis Model Assessment (HOMA) verze 2.2 (University of Oxford, UK). Apolipoproteiny A-I a B-100 a lipoprotein (a) jsou stanoveny nefelometrií v automatizovaném systému a reagenciemi od Dade-Behring® (Marburg, Německo).

Ultrazvuk krkavice: Ateroskleróza krkavice se odhaduje pomocí ultrazvuku v B-módu s vysokým rozlišením na zadní stěně společné krkavice.

Izolace lipoproteinu: HDL od každého účastníka studie je izolován z plazmy pomocí ultracentrifugace (Beckman Coulter Inc., Palo Alto, USA).

Chemické složení HDL: Pomocí komerčně dostupných enzymatických souprav se měří obsah HDL celkových proteinů, celkového cholesterolu, volného cholesterolu, fosfolipidů, triglyceridů a apolipoproteinu A-I. Cholesterylester (CE) se vypočítá jako rozdíl mezi celkovým cholesterolem a volným cholesterolem krát 1,67. Molární koncentrace HDL se odhaduje na základě celkové hmotnosti částic a molekulové hmotnosti.

Fyzikálně-chemická charakterizace HDL: Velikost částic HDL se určuje pomocí dynamického rozptylu světla a potenciál zeta pomocí laserové Dopplerovy mikroelektroforézy.

Stanovení proteinů podílejících se na metabolismu HDL: Aktivita přenosového proteinu cholesterolu, proteinu přenosu fosfolipidů, lipoproteinové lipázy, jaterní lipázy a lecitin:cholesterol acyltransferázy se stanovuje pomocí radiometrických exogenních testů.

Funkce HDL: Kapacita odtoku cholesterolu, antioxidační aktivita, náchylnost k oxidaci, protizánětlivá aktivita a inhibice agregace krevních destiček se měří pomocí přímých a konsolidovaných metodologií.

Statistické analýzy: Rozdíly mezi skupinami jsou hodnoceny pomocí ANOVA nebo Kruskal-Wallis, s Bonferroniho post-hoc analýzou vícenásobného srovnání, podle variabilního rozdělení. Chi-Square se používá k porovnání kategorických dat. Po kontrole proměnných pomocí histogramů, grafů normality a grafů zbytkového rozptylu, které testovaly linearitu, normalitu a rozptyl, se také používá analýza kovariance (ANCOVA) upravená o matoucí proměnné. K posouzení vztahů mezi proměnnými se používá Pearsonův korelační test. Oboustranná p-hodnota 0,05 je považována za významnou.