Mesenkymale stamceller til strålingsinduceret Xerostomi (MESRIX)

Design Randomiseret, kontrolleret forsøg med blinding. For at opretholde tildelingsskjul vil alle deltagere, plejere, forsøgsefterforskere og resultatbedømmere undtagen Blodbankens personale blive blindet over for interventionen. Personale fra Blodbanken vil ikke som sådan have direkte kontakt med patienterne (herefter deltagerne).

Projektplan Til optagelse i undersøgelsen vil deltagerne få taget deres sædvanlige sygehistorie efter retningslinjer fra Øre-næse-halskirurgisk afdeling, Københavns Universitetshospital Rigshospitalet.

Alle deltagere vil gennemgå en minilæbe-sugning, hvorfra MSC'er ex vivo udvides i en god fremstillingspraksis (GMP)-godkendt renrumsfacilitet (The Blood Bank, sektion 2014). Når cellerne ankommer til Blodbanken, vil deltagerne blive randomiseret til enten ex vivo ekspansion af deres mesenkymale stamceller eller at få dem frosset til potentiel senere brug. Forventet ex vivo ekspansionsfase er 3-4 uger. Oprensningen og isoleringen vil være baseret på en protokol, der tidligere er godkendt til klinisk brug.

Mængde af MSC'er, der kræves til injektion. Baseret på publicerede dyreforsøg varierer mængden givet for xerostomi til mus fra 2 x 105 til 2 x 106 [19]. For at konvertere disse musedata til en realistisk dosis hos mennesker har vi ekstrapoleret baseret på følgende data: Volumentætheden af ​​submandibulære kirtler er meget tæt på 1 (1,06-1,07) mg/mm3) [27]. I museundersøgelserne med strålebehandling var den gennemsnitlige kirtelvægt ca. 350 mg, hvilket svarer til et omtrentligt volumen på 350 mm3. Derfor er musedosis pr. kirtelvolumen er cirka 286.000-2.860.000 celler pr. cm3 kirtel (når det beregnes fra enten 1 x 105 til 1 x 106). Volumenet af den submandibulære kirtel hos mennesker efter strålebehandling er 6,6-7,9 cm3 [28]. Dette svarer til en omtrentlig dosis pr. patient på mellem 1,9 x 106 til 2,2 x 106, eller 1,9 x 107 til 2,2 x 107 celler pr. submandibulær kirtel. Ud fra ovenstående antagelser og for ikke at give til få celler har vi valgt at fortsætte med den maksimale dosis svarende til 2,8*10^6 MSC/cm^3 kirtel, dvs. en maksimal total dosis pr. patient på ca. 4,6 * 10 ^7 MSC'er. Men for at standardisere den dosis, der gives til patienter, vil den indgivne mængde blive standardiseret til størrelsen af ​​deres submandibulære kirtler, som beskrevet nedenfor.

Injektion af MSC'er i submandibulære kirtler. Forsøgspersonerne vil gå til ØNH-afdelingen, sektion 2073 for indlagte procedurer. Det kirurgiske indgreb udføres under lokalbedøvelse ved hjælp af ultralydsvejledning og steril teknik. Efter at have modtaget MSC-suspensionen eller placebo-suspensionen, vil kirurgen identificere de submandibulære kirtler og injicere suspensions-MSC'erne. Beregning af injiceret antal MSC'er pr. deltager hviler på følgende beregning: , hvor volumen er volumen af ​​den submandibulære kirtel, og et kirtelvolumen på ca. 7-8cm3 er normen. Derfor vil mængden af ​​celler givet til hver deltager være ca. i alt. Efterfølgende får deltageren et plaster og håndkøbs-analgetika. MSC'erne vil blive suspenderet i isotonisk NaCl (0,9 mg/ml) og Human Albumin (HA) 1 % til et slutvolumen på 2 ml. Placebo vil være 2 ml isotonisk NaCl (0,9 mg/ml) og HA 1 %.

Opfølgning MR af modtagerstedet vil blive udført efter 3-4 uger og 3-4 måneder postoperativt. MR anvendes til volumenbestemmelse af spytkirtler og kontrol af modtagersted.

Efter 3-4 måneder udtages en lille biopsi tilfældigt fra en af ​​de to spytkirtler. Indgrebet foregår i lokalbedøvelse. Histologi bestemmes (prøver er blindet for patologen).

Når den afsluttende MR, biopsi og spytfunktionstest er udført ca. 3-4 måneder efter behandlingen afsluttes specifikke undersøgelsesrelaterede tests og aktiviteter. For at opdage sene komplikationer eller sene uønskede hændelser inviteres alle undersøgelsesdeltagere, der modtog MSC-behandling, til kontrol 1 år og 3 år efter behandlingen.

Sikkerhed, isolering og udbredelse af MSC Blodbanken har sin cellevævsgodkendelse fra Sundhedsstyrelsen (ifølge vævsloven), samt en Producent-/Importørautorisation vedrørende humane lægemidler, de nødvendige fysiske faciliteter, personale og operationelle ressourcer til at producere MSC'er i overensstemmelse med god fremstillingspraksis (GMP).

MSC-produktet vil blive testet for anerkendte overflademarkører (CD73, CD90, CD105,) ved hjælp af flowcytometri og gennemgå generelle kvalitetstjek før den endelige frigivelse (cellelevedygtighed og test for mikroorganismer). Med hensyn til dyrkningen af ​​MSC vil vi bruge basalt medium suppleret med humant blodpladelysat fra raske bloddonorer i stedet for den tidligere brug af animalsk serum (føtalt bovint serum, FBS). Dette har følgende fordele: 1) Ingen sandsynlighed for transfektion af både kendte og ukendte dyrepatogener, eller risiko for xeno-immunisering 2) Lille batch-til-batch variation og dermed mere ensartet vækstpræstation, da hver gruppe er forberedt fra ca. 50 raske donorer.

Al høst, isolering, ekspansion osv. af MSC vil være i overensstemmelse med GMP-reglerne. Blodbanken har renrumsfaciliteter godkendt af Sundhedsstyrelsen til GMP-kompatibel celleudvidelse til klinisk brug, og alle undersøgelser vil blive udført af specialuddannet personale.

Vurdering af xerostomi og subjektivt behandlingsresultat Behandlingens subjektive effekt vurderes ved en 100 mm visuel analog skala af xerostomi udfyldt af patienten [31] og et lægevurderet spørgeskema [32], både udført før og efter behandling. Hver deltager vil også blive spurgt om daglige symptomer på mundtørhed i henhold til UKU side-effekt vurderingsskalaen punkt 3.3 [29]. Denne skala omfatter fire point, hvor 0 angiver ingen følelse af mundtørhed, 1 angiver en let følelse af mundtørhed, 2 angiver en alvorlig følelse af mundtørhed, og 3 angiver generende følelse af mundtørhed, der gør tale og spisning vanskeligt.

Vurdering af spytstrømningshastighed og objektivt behandlingsresultat Ændringer i sekretionshastigheden af ​​det ustimulerede hele spyt i mundhulen er nok den vigtigste parameter for den biologiske udvikling af xerostomi og medfølgende patologiske orale tilstande. Helt spyt, fx det blandede sekret fra de større og mindre spytkirtler, blandes i mundhulen. En korrekt bestemmelse af denne værdi er afgørende for vurderingen af ​​behandlingsresultatet i dette projekt. Til vurdering af spytstrømningshastigheden vil hele spyt blive indsamlet mellem kl. 9 og 12. Forsøgspersoner vil afholde sig fra at spise, drikke, ryge og mundhygiejne i 2 timer før samlingen. Efter at have siddet oprejst i en stol slapper de af i 5 min og bliver derefter instrueret i at lave så få bevægelser som muligt, herunder synke, under opsamlingen.

Før og efter behandling vil ustimuleret hel spyt blive opsamlet ved brug af spyttemetoden [33], hvor deltagerne spytter deres spyt i en opsamlingsbeholder over en periode på 15 minutter. Spytstrømningshastigheden (SFR) (ml/min) bestemmes som stigningen i beholderens vægt divideret med opsamlingstiden i minutter.

Efter opsamling af ustimuleret spyt instrueres forsøgspersonerne i at tygge på 1 g steril paraffinvoks. De vil blive bedt om at holde munden lukket under tygningen og undgå at synke. Hvert 60. sekund vil de blive bedt om at spytte ind i en ny spytopsamler, før de starter en ny tyggeperiode. Dette gentages i 5 min.

For at vurdere behandlingsresultatet af de submandibulære kirtler, opsamles spyt også direkte fra mundbunden i en ustimuleret og stimuleret tilstand. Den ustimulerede hele spytstrømningshastighed af de submandibulære kirtler vil blive vurderet ved podningsmetoden med bomuldsruller placeret bukkalt i hver maksillær molar region og under tungen på mundbunden. Umiddelbart før påbegyndelse af indsamlingen vil de blive bedt om at synke, hvis dette ikke er muligt, vil spyt blive ekstraheret med en pipette. Samlingen finder sted i to efterfølgende perioder á 3 min., og i slutningen af ​​hver menstruation tørres hagen og læberne af med en serviet. Spytstrømningshastigheder bestemmes efter vægt (1 g svarer til 1 ml spyt) med ruller og servietter vejet før opsamling og genvejet efter. Strømningshastighederne beregnes som stigningen i vægt under opsamling og udtrykt som milliliter pr. minut. Spyt fra bomuldsrullerne vil blive ekstraheret ved centrifugering (1500g) og analyseret for dets sammensætning. Denne stimulerede indsamlingsproces udføres efterfølgende med citrusholdige ruller for at stimulere de submandibulære kirtler maksimalt. Fra hver af disse samlinger af spyt vil spyt blive udtaget og opbevaret ved -800C.

Kemisk analyse af spyt Helt spyt indeholder et stort antal bakterier og epitelceller samt tandkødsspaltevæske. Derfor er hel spyt normalt ikke egnet til analyse af følsomme kemiske parametre. Til dette formål er det selektivt indsamlede spyt fra individuelle kirtler meget bedre. Som følge heraf kan størstedelen af ​​analyserne udføres fra enten parotis og submandibulær kirtel / sublingualis spyt. Følgende analyser vil blive udført på det opsamlede spyt: pH og bicarbonat ved ionbalance-estimering [34], natrium, kalium, calcium, fosfat, chlorid og fluorid [35], totalt protein og udvalgte proteiner [36] og amylase [37] . Formålet med undersøgelserne er at vurdere, om spyt vil blive normaliseret efter behandling, og dermed give et estimat for spyttand- og slimhindebeskyttende kapacitet før og efter behandling.

Dataindsamling og analyse Kildedata: Der vil være kildedokumentation for alle data i Case Report Form (CRF).

Studielederen giver direkte adgang til undersøgelsesdata og undersøgelsesdokumenter til overvågning, audit og inspektion af Videnskabsetisk Komité, Sundhedsstyrelsen eller lignende myndigheder i andre lande. Der vil blive søgt tilladelse fra Datatilsynet til behandling af personoplysninger efter databeskyttelsesloven. Ansøgninger sendes via advokatsekretariatet, Rigshospitalet.