방사선 유발 구강건조증을 위한 중간엽 줄기세포 (MESRIX)

눈가림이 있는 무작위 통제 시험을 설계합니다. 할당 은폐를 유지하기 위해 혈액 은행 직원을 제외한 모든 참가자, 간병인, 시험 조사자 및 결과 평가자는 개입에 대해 눈이 멀게 됩니다. 이와 같이 혈액원 직원은 환자(이하 참가자)와 직접 접촉하지 않는다.

프로젝트 계획 연구에 포함하기 위해 참가자는 코펜하겐 대학 병원 Rigshospitalet 귀, 코 및 인후 수술 부서의 지침에 따라 일반적인 병력을 가지고 있습니다.

모든 참가자는 소형 입술 흡입술을 받게 되며 MSC는 GMP(Good Manufacturing Practice) 승인 클린룸 시설에서 생체 외 확장됩니다(The Blood Bank, 섹션 2014). 세포가 혈액 은행에 도착하면 참가자는 무작위로 중간엽 줄기 세포의 생체 외 확장 또는 나중에 사용할 수 있도록 동결됩니다. 예상되는 생체 외 확장 단계는 3-4주입니다. 정제 및 분리는 이전에 임상용으로 승인된 프로토콜을 기반으로 합니다.

주사에 필요한 중간엽 줄기세포의 양 발표된 동물 연구에 근거하여 쥐에게 구강건조증에 주어진 양은 2 x 105에서 2 x 106까지 다양합니다[19]. 이 마우스 데이터를 인간의 실제 용량으로 변환하기 위해 다음 데이터를 기반으로 외삽했습니다. 턱밑 샘의 부피 밀도는 1(1.06-1.07)에 매우 근접합니다. mg/mm3) [27]. 방사선 요법에 대한 마우스 연구에서 평균 샘 무게는 약 350mg이었고, 이는 대략 350mm3의 부피에 해당합니다. 따라서 마우스 용량 pr. 글랜드 부피는 약 286.000-2.860.000세포입니다. 홍보 cm3 글랜드(1 x 105에서 1 x 106으로 계산할 때). 방사선 치료 후 인간 피험자의 턱밑 샘의 부피는 6.6-7.9cm3입니다. [28]. 이것은 대략적인 복용량 pr에 해당합니다. 1.9 x 106 ~ 2.2 x 106, 또는 1.9 x 107 ~ 2.2 x 107 세포 pr. 턱밑 샘. 위의 가정에서 소수의 세포에 영향을 주지 않기 위해 우리는 2.8*10^6 MSC/cm^3 샘에 해당하는 최대 용량, 즉 약 4,6 * 10의 환자당 최대 총 용량으로 진행하기로 선택했습니다. ^7 MSC. 그러나 환자에게 투여되는 용량을 표준화하기 위해 투여량은 아래에 설명된 바와 같이 턱밑샘의 크기에 따라 표준화됩니다.

턱밑샘에 중간엽 줄기세포 주입 피험자는 입원 절차를 위해 ENT 부서 섹션 2073으로 이동합니다. 수술 절차는 초음파 유도 및 멸균 기술을 사용하여 국소 마취하에 시행됩니다. MSC 서스펜션 또는 위약 서스펜션을 받은 후 외과의는 턱밑 샘을 식별하고 서스펜션 MSC를 주입합니다. 주입된 MSC 수 계산 pr. 참가자는 다음 계산에 의존합니다. 여기서 볼륨은 턱밑 샘의 볼륨이고 앱의 샘 볼륨입니다. 7-8cm3가 표준입니다. 따라서 각 참여자에게 주어지는 셀의 양은 앱이 됩니다. 전체적으로. 그 후 참가자는 반창고와 처방전 없이 살 수 있는 진통제를 받게 됩니다. MSC는 Isotonic NaCl(0,9 mg/ml) 및 인간 알부민(HA) 1%에서 최종 부피 2ml로 현탁됩니다. 위약은 2ml의 등장성 NaCl(0,9mg/ml) 및 HA 1%입니다.

수술 후 3-4주, 3-4개월 후에 수혜자 추적 MRI를 시행합니다. MRI는 타액선의 체적 측정 및 수혜자 위치 조절에 사용됩니다.

3~4개월 후 두 개의 침샘 중 하나에서 작은 생검을 무작위로 채취합니다. 절차는 국소 마취하에 진행됩니다. 조직학이 결정됩니다(샘플은 병리학자에게 눈이 멀게 됩니다).

최종 MRI, 생검 및 타액 기능 검사가 수행되었을 때 약. 치료 특정 연구 관련 시험 및 활동 후 3-4개월이 종료됩니다. 후기 합병증 또는 후기 부작용을 발견하기 위해 MSC 치료를 받은 모든 연구 참가자는 치료 후 1년 및 3년 후에 검진을 받도록 초대됩니다.

MSC의 안전, 격리 및 증식 The Blood Bank는 덴마크 보건의약청(덴마크 조직법에 따름)의 세포 조직 승인과 인간 의약품에 대한 제조업체/수입 승인, 필요한 물리적 시설, GMP(Good Manufacturing Practice)에 따라 MSC를 생산하기 위한 인력 및 운영 자원.

MSC 제품은 유세포 분석법을 사용하여 인식된 표면 마커(CD73, CD90, CD105)에 대해 테스트하고 최종 출시 전에 일반적인 품질 검사(세포 생존도 및 미생물 테스트)를 거칩니다. MSC의 배양과 관련하여 우리는 이전에 동물 유래 혈청(fetal bovine serum, FBS)을 사용하는 대신 건강한 헌혈자의 인간 혈소판 용해물이 보충된 기본 배지를 사용합니다. 이는 다음과 같은 이점이 있습니다. 1) 알려지거나 알려지지 않은 동물 병원체의 형질감염 가능성 또는 이종 면역화의 위험이 없습니다. 건강한 기증자 50명.

MSC의 모든 수확, 분리, 확장 등은 GMP 규정에 따릅니다. Blood Bank는 임상용 GMP 준수 세포 확장을 위해 덴마크 보건의약국(Danish Health and Medicines Authority)의 승인을 받은 클린룸 시설을 갖추고 있으며 모든 연구는 특별 훈련을 받은 직원이 수행합니다.

구강 건조증 평가 및 주관적 치료 결과 치료의 주관적 효과는 환자가 작성한 구강 건조증의 100mm 시각적 아날로그 척도[31]와 의사가 평가한 설문지[32]를 사용하여 평가합니다. 치료. 각 참가자는 또한 UKU 부작용 등급 척도 항목 3.3 [29]에 따라 구강 건조의 일일 증상에 대해 질문을 받습니다. 이 척도는 0점은 구강건조감이 없음, 1점은 약간의 구강건조감, 2점은 심한 구강건조감, 3점은 말하거나 먹기가 곤란할 정도의 곤란한 구강건조감이다.

타액 흐름 속도 및 객관적인 치료 결과 평가 구강 내 자극되지 않은 전체 타액의 분비 속도 변화는 아마도 구강 건조증 및 수반되는 병적 구강 상태의 생물학적 발달에 가장 중요한 매개변수일 것입니다. 전체 타액, 예를 들어 주요 타액선과 소타액선의 혼합 분비물이 구강에서 혼합됩니다. 이 값의 정확한 결정은 이 프로젝트의 치료 결과 평가에 매우 중요합니다. 타액 유속 평가를 위해 오전 9시에서 12시 사이에 전체 타액을 수집합니다. 피험자는 채취 2시간 전부터 음식물 섭취, 흡연, 구강위생을 금합니다. 의자에 똑바로 앉은 후 5분 동안 휴식을 취한 다음 수집하는 동안 삼키는 것을 포함하여 가능한 한 적은 움직임을 하도록 지시합니다.

치료 전후 자극되지 않은 전체 타액은 참가자가 15분 동안 수집 용기에 침을 뱉는 침 방법 [33]을 사용하여 수집됩니다. 타액 유속(SFR)(ml/분)은 용기의 중량 증가를 수집 시간(분)으로 나눈 값으로 결정됩니다.

자극되지 않은 타액을 수집한 후 피험자는 멸균 파라핀 왁스 1g을 씹도록 지시받습니다. 그들은 씹는 동안 입을 다물고 삼키는 것을 피하도록 요청받을 것입니다. 60초마다 새 씹는 기간을 시작하기 전에 새 타액 수집기에 침을 뱉도록 요청합니다. 이것은 5분 동안 반복될 것이다.

턱밑샘의 치료 결과를 평가하기 위해 자극을 받지 않은 상태와 자극을 받은 상태에서 구강 바닥에서 직접 타액을 채취하기도 합니다. 턱밑 샘의 자극되지 않은 전체 타액 유속은 각 상악 어금니 부위와 입 바닥의 혀 아래에 협측으로 놓인 면봉으로 면봉 방법으로 평가됩니다. 수집 시작 직전에 삼키라는 요청을 받게 되며, 불가능한 경우 피펫으로 타액을 추출합니다. 수집은 3분씩 2회에 걸쳐 이루어지며 각 기간이 끝나면 턱과 입술을 냅킨으로 닦습니다. 타액 유속은 롤 및 냅킨의 무게를 수집 전에 칭량하고 수집 후에 다시 칭량하여 중량(1g은 타액 1ml와 같음)으로 결정됩니다. 유속은 수집하는 동안 중량 증분으로 계산되며 분당 밀리리터로 표시됩니다. 면봉의 타액을 원심분리(1500g)로 추출하고 성분을 분석합니다. 이 자극 수집 과정은 악하선을 최대한 자극하기 위해 시트러스 함유 롤로 나중에 수행됩니다. 이러한 타액 수집물 각각에서 타액을 분주하여 -800C에서 보관합니다.

타액의 화학적 분석 전체 타액에는 치은 열구액뿐만 아니라 많은 수의 박테리아와 상피 세포가 포함되어 있습니다. 따라서 전체 타액은 일반적으로 민감한 화학적 매개변수의 분석에 적합하지 않습니다. 이를 위해 개별 땀샘에서 선택적으로 수집된 타액이 훨씬 더 좋습니다. 그 결과 대부분의 분석은 귀밑샘과 턱밑샘/설하선 타액에서 수행할 수 있습니다. 수집된 타액에 대해 다음과 같은 분석이 수행됩니다: 이온 균형 추정에 의한 pH 및 중탄산염[34], 나트륨, 칼륨, 칼슘, 인산염, 염화물 및 불소[35], 총 단백질 및 선택된 단백질[36] 및 아밀라아제[37] . 연구의 목적은 치료 후 타액이 정상화되는지 여부를 평가하여 치료 전후 타액 치아 및 점막 보호 능력의 추정치를 제공하는 것입니다.

데이터 수집 및 분석 소스 데이터: 사례 보고서 양식(CRF)의 모든 데이터에 대한 소스 문서가 있습니다.

연구 책임자는 과학 윤리 위원회, 덴마크 보건 및 의약품 당국 또는 다른 국가의 유사한 기관의 모니터링, 감사 및 검사를 위해 연구 데이터 및 연구 문서에 직접 액세스할 수 있습니다. 덴마크 데이터 보호법에 따라 개인 데이터 처리를 위해 DPA의 허가를 받아야 합니다. 신청서는 법률 사무국인 Rigshospitalet를 통해 발송됩니다.