放射線誘発性口腔乾燥症のための間葉系幹細胞 (MESRIX)

盲検化を伴う無作為対照試験の設計。 割り当ての隠蔽を維持するために、血液バンクのスタッフを除くすべての参加者、介護者、治験担当医師、および結果評価者は、介入に対して盲検化されます。 血液銀行のスタッフは、患者（以下、参加者）と直接接触することはありません。

プロジェクト計画 研究参加者は、コペンハーゲン大学病院リグショスピタレットの耳鼻咽喉科のガイドラインに従って、通常の病歴を取得します。

すべての参加者はミニ口唇吸引を受け、そこから MSC は適正製造基準 (GMP) で承認されたクリーン ルーム施設 (The Blood Bank、セクション 2014) で ex vivo で拡張されます。 細胞が血液バンクに到着すると、参加者は、間葉系幹細胞の生体外での増殖または後で使用できるように凍結するかのいずれかに無作為に割り付けられます。 予想される ex vivo 拡張フェーズは 3 ～ 4 週間です。 精製と分離は、以前に臨床使用が承認されたプロトコルに基づいて行われます。

注射に必要な MSC の量 発表された動物研究に基づくと、マウスの口腔乾燥症に与えられる量は 2 x 105 から 2 x 106 までさまざまです [19]。 これらのマウスのデータを人間の現実的な用量に変換するために、以下のデータに基づいて外挿しました: 顎下腺の体積密度は 1 (1.06-1.07 mg/mm3) [27]。 放射線療法に関するマウスの研究では、腺の平均重量は約 350mg で、これは約 350mm3 の体積に相当します。 したがって、マウス用量pr。 腺容量は約 286.000-2.860.000cells 広報 cm3 腺 (1 x 105 から 1 x 106 のいずれかから計算した場合)。 放射線治療後のヒト被験者の顎下腺の体積は6.6-7.9cm3です [28]。 これは、おおよその線量 pr に対応します。 1.9 x 106 から 2.2 x 106、または 1.9 x 107 から 2.2 x 107 細胞の患者。 顎下腺。 上記の仮定から、少数の細胞に投与しないようにするために、2.8*10^6 MSC/cm^3 腺に対応する最大線量、つまり患者あたりの最大総線量は約 4.6 * 10 で進めることを選択しました。 ^7 MSC。 ただし、患者に投与する用量を標準化するために、以下に説明するように、患者の顎下腺の大きさに合わせて投与量を標準化します。

顎下腺へのMSCの注射 患者は、入院処置のために耳鼻咽喉科、セクション2073に行きます。 外科的処置は、超音波ガイドと無菌技術を使用して局所麻酔下で行われます。 MSC 懸濁液またはプラセボ懸濁液を受け取った後、外科医は顎下腺を特定し、懸濁液の MSC を注入します。 注入された MSC の数の計算 pr。 参加者は、次の計算に基づいています: 、ここで、ボリュームは顎下腺のボリュームであり、アプリの腺ボリュームです。 7～8cm3が標準です。 したがって、各参加者に与えられるセルの量は app になります。合計で。 その後、参加者にはバンドエイドと市販の鎮痛剤が与えられます。 ＭＳＣは、等張ＮａＣｌ（０．９ｍｇ／ｍｌ）およびヒトアルブミン（ＨＡ）１％に懸濁され、最終容量２ｍｌになる。 プラセボは 2ml の等張 NaCl (0.9mg/ml) と HA 1% です。

レシピエントの場所のフォローアップMRIは、術後3〜4週間および3〜4か月後に行われます。 MRI は、唾液腺の量の測定とレシピエントの場所の制御に使用されます。

3 ～ 4 か月後、2 つの唾液腺の 1 つから小さな生検を無作為に採取します。 手順は局所麻酔下で行われます。 組織学が決定されます（サンプルは病理学者には知らされていません）。

最終的な MRI、生検、唾液機能検査が約 2 回行われると、 治療後 3 ～ 4 か月で、特定の研究に関連するテストと活動が終了します。 遅発性合併症または遅発性有害事象を検出するために、MSC治療を受けたすべての研究参加者は、治療の1年後および3年後の健康診断に招待されます。

MSC の安全性、分離および増殖 血液銀行は、デンマークの健康および医薬品当局から細胞組織の承認を受けており (デンマークの組織法に従って)、必要な物理的施設であるヒト用医薬品に関する製造業者/輸入業者の認可を受けています。適正製造基準 (GMP) に従って MSC を製造するための人員および運用リソース。

MSC 製品は、フローサイトメトリーを使用して認識されている表面マーカー (CD73、CD90、CD105) についてテストされ、最終リリースの前に一般的な品質チェック (細胞生存率および微生物のテスト) を受けます。 MSC の培養に関しては、動物由来の血清 (ウシ胎児血清、FBS) の以前の使用の代わりに、健康な献血者からのヒト血小板溶解物を添加した基礎培地を使用します。 これには次の利点があります: 1) 既知および未知の動物病原体の両方のトランスフェクションの可能性、または異種免疫のリスクがありません。 50人の健康なドナー。

MSC のすべての収穫、分離、拡大などは、GMP 規制に従って行われます。 血液銀行には、臨床使用のための GMP 準拠の細胞増殖用にデンマーク保健医療局によって承認されたクリーン ルーム設備があり、すべての研究は特別に訓練された担当者によって実施されます。

口腔乾燥症と主観的治療結果の評価 治療の主観的効果は、患者が記入した口腔乾燥症の 100 mm の視覚的アナログスケール [31] と医師評価のアンケート [32] によって評価されます。処理。 各参加者は、UKU 副作用評価尺度項目 3.3 [29] に従って、口渇の毎日の症状についても質問されます。 この尺度は、0 が口渇感なし、1 が軽度の口渇感、2 が重度の口渇感、3 が会話や食事が困難な厄介な口渇感の 4 つのスコアで構成されています。

唾液流量と客観的な治療結果の評価 口腔内の刺激されていない全唾液の分泌速度の変化は、口腔乾燥症およびそれに伴う病的口腔状態の生物学的発達にとっておそらく最も重要なパラメーターです。 唾液全体、例えば、大唾液腺と小唾液腺からの混合分泌物が口腔内で混合されます。 この値の正確な決定は、このプロジェクトでの治療結果の評価にとって重要です。 唾液の流量を評価するために、午前 9 時から 12 時の間に全唾液を採取します。 被験者は、収集の2時間前から飲食、喫煙、口腔衛生を控えます。 椅子に直立して座った後、5分間リラックスし、収集中に飲み込むなどの動きをできるだけ少なくするように指示されます.

治療の前後に、参加者が 15 分間にわたって収集容器に唾液を吐き出す吐き出し法 [33] を使用して、刺激されていない全唾液を収集します。 唾液流量（ＳＦＲ）（ｍｌ／分）は、容器の重量増加を収集時間（分）で割ったものとして決定される。

刺激されていない唾液を採取した後、被験者は 1 g の滅菌パラフィン ワックスを噛むように指示されます。 咀嚼中は口を閉じたままにし、飲み込まないようにするよう求められます。 60 秒ごとに、新しい咀嚼期間を開始する前に、新しい唾液収集器に唾を吐き出すように求められます。 これは 5 分間繰り返されます。

顎下腺の治療結果を評価するために、唾液も非刺激および刺激状態で口の床から直接収集されます。 刺激されていない顎下腺の全唾液流量は、上顎大臼歯の各領域と口の底の舌の下に頬側に配置されたコットンロールを使用したスワブ法によって評価されます。 採取開始直前に飲み込むように指示されますが、飲み込めない場合はピペットで唾液を採取します。 収集は、3 分間の 2 つの連続した期間中に行われ、各期間の終わりに、顎と唇がナプキンで拭き取られます。 唾液の流速は、収集前に重量を測定し、収集後に再重量を測定したロールとナプキンの重量 (1 g は 1 ml の唾液に等しい) によって決定されます。 流量は、収集中の重量の増分として計算され、ミリリットル/分で表されます。 コットンロールからの唾液を遠心分離 (1500g) によって抽出し、その組成を分析します。 この刺激された収集プロセスは、顎下腺を最大限に刺激するために柑橘類を含むロールでその後実行されます。 これらの唾液のコレクションのそれぞれから、唾液を等分し、-80℃で保存します。

唾液の化学分析 唾液全体には、多数の細菌や上皮細胞、歯肉溝液が含まれています。 したがって、唾液全体は通常、敏感な化学パラメータの分析には適していません。 この目的のためには、個々の腺から選択的に収集された唾液がはるかに優れています。 その結果、分析の大部分は、耳下腺および顎下腺/舌下唾液のいずれかから実行できます。 収集された唾液に対して次の分析が行われます: イオンバランス推定による pH および重炭酸塩 [34]、ナトリウム、カリウム、カルシウム、リン酸、塩化物、およびフッ化物 [35]、総タンパク質および選択されたタンパク質 [36]、およびアミラーゼ [37] . この研究の目的は、治療後に唾液が正常化されるかどうかを評価し、治療前後の唾液の歯と粘膜の保護能力を推定することです。

データの収集と分析 ソースデータ: 症例報告フォーム (CRF) にすべてのデータのソース文書があります。

研究責任者は、科学倫理委員会、デンマーク保健医療当局、または他の国の同様の当局の監視、監査、および検査のために、研究データおよび研究文書に直接アクセスすることを許可します。 デンマークのデータ保護法に基づく個人データの処理については、DPA から許可が求められます。 申請書は、法務事務局である Rigshospitalet を通じて送信されます。