Polymorphismus-Interaktion zur Vorhersage der Wirksamkeit von Bevacizumab (BEVAGENE)

Patientinnen mit metastasiertem Brustkrebs (MBC) aus acht italienischen Abteilungen der Medizinischen Onkologie mit histologisch bestätigtem HER2-negativem MBC, behandelt mit einer Erstlinientherapie, einschließlich Bevacizumab 10 mg/m2 i.v. an den Tagen 1 und 15 kombiniert mit Paclitaxel der ersten Wahl 90 mg/m2 i.v. An den Tagen 1, 8 und 15 werden alle 4 Wochen für die vorliegende pharmakogenetische Studie eingeschrieben. MBC-Patienten, die mit einer Erstlinien-Chemotherapie einschließlich Paclitaxel ohne Bevacizumab behandelt werden, werden ebenfalls als Kontrollgruppe aufgenommen.

Stellen mit metastatischer Erkrankung werden bei Patienten mit messbarer Erkrankung gemäß den RECIST-Kriterien 1.1 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors) radiologisch neu bewertet. Bei Patienten ohne messbare Läsionen wird das Fortschreiten der Krankheit dann definiert, wenn neue Läsionen auftraten oder wenn sich bestehende Läsionen entwickelten. Ebenso wird im Falle nicht messbarer Läsionen eine Verschlechterung des klinischen Zustands, die nicht auf die Toxizität der Behandlung zurückzuführen ist, als Fortschreiten der Krankheit definiert.

Das progressionsfreie Überleben (PFS) wird als der Zeitraum vom Beginn der Behandlung bis zur ersten Beobachtung des oben beschriebenen Fortschreitens der Krankheit oder des Todes jeglicher Ursache definiert. Alle Patienten werden auf Ansprechen, PFS und Gesamtüberleben untersucht. Jeder Patient, der an der Studie teilnimmt, unterzeichnet die Einverständniserklärung. Das Protokoll wurde von der Ethikkommission der Azienda Ospedaliera-Universitaria Pisana, Pisa, Italien, genehmigt (CESM 3077/2010).

Genotypisierungsanalysen Blutproben (3 ml) werden in Röhrchen mit Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) gesammelt und bei -80 °C gelagert. Für die vorliegenden Analysen werden Gene und Polymorphismen ausgewählt, die am Angiogeneseweg beteiligt sind und bereits als Prädiktoren für die Bevacizumab-Reaktion gelten. Die Keimbahn-DNA-Extraktion wird mit dem QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Valencia, Kalifornien, USA) durchgeführt. Die Alleldiskriminierung von Genen wird mit einem ABI PRISM 7900 SDS-Instrument (Applied Biosystems, Carlsbad, Kalifornien, USA) und mit validierten TaqMan® SNP-Genotypisierungstests (Applied Biosystems) durchgeführt. PCR-Reaktionen werden gemäß dem Protokoll des Herstellers durchgeführt. Die Genotypisierung wird erst durchgeführt, wenn eine ausreichende Anzahl von Ereignissen (>80 % der Studienpopulation) im Hinblick auf das PFS gemeldet wird.

Statistische Analyse Das erste Ziel dieser retrospektiven Analyse wird darin bestehen, die mögliche Rolle dieser untersuchten Genpolymorphismen bei der Vorhersage der Bevacizumab-Reaktion im Hinblick auf das PFS zu bewerten. Die sekundären Endpunkte werden die Korrelationen mit dem Gesamtüberleben (OS) und der Rücklaufquote sein. Alle Polymorphismen werden auf Abweichung vom Hardy-Weinberg-Gleichgewicht (HWE) analysiert, indem die beobachteten Allelverteilungen mit denen verglichen werden, die vom HWE durch einen χ2-Test erwartet werden. Jede Korrelation zwischen Genpolymorphismen und Antwortrate wird durch den zweiseitigen Fisher's Exact Test analysiert. Der Zusammenhang zwischen jedem einzelnen Polymorphismus und den relevantesten klinisch-pathologischen Merkmalen mit PFS wird mithilfe eines Cox-Proportional-Hazards-Modells getestet. Die Multifaktor-Dimensionalitätsreduktionsmethode (MDR) wird angewendet (unter Verwendung der Version 2.0 Beta 6 der MDR-Software, verfügbar unter http://sourceforge.net/projects/mdr/), um die Rolle einer Interaktion zwischen Genpolymorphismen bei der Identifizierung von Biomarkern von Paclitaxel zu untersuchen plus Bevacizumab-Reaktion.

Für weitere Analysen wird die Genotypkombination mit dem höchsten PFS-Vorteil, der mit einer OS-Verbesserung einhergeht, ausgewählt. Der Unterschied im PFS zwischen günstigen genetischen Profilen und ungünstigen genetischen Profilen wird mit dem Log-Rank-Test und der Kaplan-Meier-Methode zur Bewertung der Überlebenskurven bewertet. Zur Berechnung der angepassten Hazards Ratio (HR) und des 95 %-Konfidenzintervalls (95 %-KI) wird ein Cox-Proportional-Hazards-Modell verwendet, bei dem die möglichen genetischen Profile sowie die klinischen und pathologischen Patientenmerkmale individuell mit dem PFS korreliert werden. Ein P-Wert von <0,05 wird als statistisch signifikant akzeptiert. Die proportionalen Gefahrenanalysen nach Kaplan-Meier und Cox werden mit der SPSS-Version 17.0 (SPSS, Chicago, IL) durchgeführt.