Interazione del polimorfismo per predire l'efficacia di Bevacizumab (BEVAGENE)

Pazienti con carcinoma mammario metastatico (MBC) provenienti da otto divisioni italiane di Oncologia Medica, con MBC HER2-negativo confermato istologicamente, trattati con una terapia di prima linea comprendente bevacizumab 10 mg/m2 i.v. nei giorni 1 e 15 in combinazione con paclitaxel di prima linea 90 mg/m2 i.v. nei giorni 1, 8 e 15, ogni 4 settimane, saranno arruolati per il presente studio di farmacogenetica. Anche i pazienti affetti da MBC trattati con una chemioterapia di prima linea comprendente paclitaxel senza bevacizumab saranno arruolati come gruppo di controllo.

I siti di malattia metastatica saranno rivalutati radiologicamente secondo i criteri 1.1 di Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST), in pazienti con malattia misurabile. Nei pazienti senza lesioni misurabili, la progressione della malattia sarà definita quando sono comparse nuove lesioni o quando si sono evolute lesioni esistenti. Parimenti, nel caso di lesioni non misurabili, il deterioramento delle condizioni cliniche non dovuto alla tossicità del trattamento, sarà definito come progressione della malattia.

La sopravvivenza libera da progressione (PFS) sarà definita come il periodo di tempo dall'inizio del trattamento alla prima osservazione della progressione della malattia come sopra descritto, o alla morte per qualsiasi causa. Tutti i pazienti saranno valutati per risposta, PFS e sopravvivenza globale. Ogni paziente che entra nello studio firmerà il consenso informato. Il protocollo è stato approvato dal comitato etico dell'Azienda Ospedaliera-Universitaria Pisana, Pisa, Italia, (CESM 3077/2010).

Analisi di genotipizzazione I campioni di sangue (3 ml) saranno raccolti in provette di acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) e conservati a -80°C. Per le presenti analisi saranno scelti geni e polimorfismi coinvolti nel pathway dell'angiogenesi e già indicati come predittori della risposta al bevacizumab. L'estrazione del DNA germinale verrà eseguita utilizzando il kit QIAamp DNA Blood Mini (Qiagen, Valencia, California, USA). La discriminazione allelica dei geni sarà eseguita utilizzando uno strumento SDS ABI PRISM 7900 (Applied Biosystems, Carlsbad, California, USA) e con saggi di genotipizzazione TaqMan® SNP (Applied Biosystems) validati. Le reazioni di PCR saranno condotte secondo il protocollo del produttore. La genotipizzazione non verrà eseguita fino a quando non sarà riportato un numero adeguato di eventi (> 80% sulla popolazione in studio) in termini di PFS.

Analisi statistica Il primo obiettivo di questa analisi retrospettiva sarà quello di valutare il possibile ruolo di questi polimorfismi genici studiati per predire la risposta al bevacizumab in termini di PFS. Gli endpoint secondari saranno le correlazioni con la sopravvivenza globale (OS) e il tasso di risposta. Tutti i polimorfismi saranno analizzati per la deviazione dall'equilibrio di Hardy-Weinberg (HWE) mediante confronto tra le distribuzioni alleliche osservate con quelle attese dal test HWE by on χ2. Eventuali correlazioni tra polimorfismi genici e tasso di risposta saranno analizzate mediante il test esatto di Fisher a due code. L'associazione tra ogni singolo polimorfismo e le caratteristiche clinico-patologiche più rilevanti con la PFS sarà testata utilizzando un modello di rischi proporzionali di Cox. Verrà applicata la metodologia Multifactor Dimensionality Reduction (MDR) (utilizzando la versione 2.0 beta 6 del software MDR disponibile su http://sourceforge.net/projects/mdr/) per studiare il ruolo di un'interazione tra polimorfismi genici nell'identificazione di biomarcatori di paclitaxel più la risposta al bevacizumab.

La combinazione genotipica con il più alto beneficio di PFS correlato a un miglioramento della OS sarà scelta per ulteriori analisi. La differenza di PFS tra i profili genetici favorevoli ei profili genetici sfavorevoli sarà valutata con il log-rank test e il metodo Kaplan-Meier per valutare le curve di sopravvivenza. Un modello di rischi proporzionali di Cox, con i possibili profili genetici e le caratteristiche cliniche e patologiche del paziente individualmente correlate con la PFS, sarà utilizzato per calcolare l'hazard ratio aggiustato (HR) e l'intervallo di confidenza al 95% (95% CI). Un valore P <0,05 sarà accettato come statisticamente significativo. Le analisi dei rischi proporzionali di Kaplan-Meier e Cox saranno eseguite utilizzando la versione 17.0 di SPSS (SPSS, Chicago, IL).