Prueba de detección de manchas de sangre seca para pacientes con colestasis neonatal (DBS-SCReNC)

Objetivos:

1. Desarrolló una prueba de detección para la colestasis neonatal usando una gota de sangre seca
2. Mejore la supervivencia del paciente mediante el diagnóstico temprano de la enfermedad de colestasis neonatal tratable, como la atresia biliar y el error congénito del metabolismo de los ácidos biliares.

Fase I - Validación del método de cuantificación de marcadores de enfermedad en gota de sangre seca.

Los niños pediátricos con diagnóstico de colestasis en el Hospital de la Universidad Nacional de Taiwán durante la admisión o en la clínica ambulatoria serán recolectados para el estudio de Fase I. Se recolectarán 5 ml de sangre venosa para medir los marcadores de la enfermedad durante el seguimiento de rutina en la clínica ambulatoria del Hospital Universitario Nacional de Taiwán. Las muestras de gotas de sangre seca (DBS, por sus siglas en inglés) se recolectan de los pacientes mediante la aplicación de sangre completa, extraída con lanceta del dedo de la mano, el talón o el dedo del pie, con un papel de filtro provisto. Para evaluar la estabilidad de los marcadores de enfermedad en DBS, se aplicará un total de 10 gotas de sangre (cada chorro de sangre contiene 50 - 75 microL de sangre) en el papel de filtro el día 0. Las muestras de gotas de sangre recolectadas de un solo paciente el día 0 será evaluado el día de la recolección de DBS y seguido por el día 3, el día 7, 6 meses y 1 año después de la recolección de la muestra. El propósito de repetir la medición de una muestra de un solo paciente en un punto de tiempo diferente es evaluar el posible efecto del efecto del tiempo en la precisión de los datos. Se separan 5 gotas de sangre y se protegen de la luz con un sobre que bloquea la luz para comparar el efecto de la luz en la degradación de los marcadores de enfermedades (Tabla 1). Los marcadores séricos de enfermedades medidos con el método convencional servirán como referencia y se compararán con las muestras de DBS en diferentes momentos. Se recolectarán 30 pacientes para validar la correlación entre el nivel de marcadores de enfermedad en suero y DBS.

Fase II - Estudio piloto En el estudio piloto, nuestro objetivo es desarrollar un método de gota de sangre seca para la detección de la colestasis neonatal. Los niños con enfermedad de colestasis neonatal previamente diagnosticada en el Departamento de Pediatría del Hospital Infantil de la Universidad Nacional de Taiwán desde 2007 o los niños recién diagnosticados serán reclutados retrospectivamente a partir de la revisión de expedientes. Los pacientes con hiperbilirrubinemia de tipo indirecto y los recién nacidos sanos se inscribirán como control. Analizaremos la colestasis neonatal y controlaremos la prueba de detección de manchas de sangre seca de los pacientes después del nacimiento para cuantificar el nivel de marcadores de la enfermedad. Se realizará un análisis de la curva ROC en la cantidad de bilirrubina para encontrar el mejor punto de corte para detectar la colestasis neonatal. El tamaño de la muestra del estudio de casos y controles es de 20 casos y 20 controles.