Test di screening delle macchie di sangue secco per pazienti con colestasi neonatale (DBS-SCReNC)

Obiettivi:

1. Sviluppato un test di screening per la colestasi neonatale utilizzando una macchia di sangue secco
2. Migliorare la sopravvivenza del paziente mediante diagnosi precoce di malattie colestasi neonatali trattabili come l'atresia biliare e l'errore congenito del metabolismo degli acidi biliari.

Fase I - Convalida del metodo per la quantificazione dei marcatori di malattia su macchia di sangue secco.

I bambini pediatrici con diagnosi di colestasi presso il National Taiwan University Hospital durante il ricovero o la clinica ambulatoriale saranno raccolti per lo studio di Fase I. Verranno raccolti 5 ml di sangue venoso per la misurazione dei marcatori di malattia durante il follow-up di routine presso la clinica ambulatoriale del National Taiwan University Hospital. I campioni di macchie di sangue essiccato (DBS) vengono raccolti dai pazienti applicando un sangue intero, prelevato con la lancetta dal dito, dal tallone o dalla punta, su una carta da filtro fornita. Per valutare la stabilità dei marcatori di malattia sulla DBS, al giorno 0 verranno applicati sulla carta da filtro un totale di 10 macchie di sangue (ogni beccuccio di sangue contiene 50-75 microL di sangue). I campioni di macchie di sangue raccolti da un singolo paziente al giorno 0 sarà valutato il giorno della raccolta DBS e seguito dal giorno 3, giorno 7, 6 mesi e 1 anno dopo la raccolta del campione. Lo scopo della misurazione ripetuta del campione di un singolo paziente in momenti diversi è quello di valutare il possibile effetto dell'effetto del tempo sull'accuratezza dei dati. 5 macchie di sangue sono separate e protette dalla luce con una busta che blocca la luce per confrontare l'effetto della luce sulla degradazione dei marcatori di malattia (Tabella 1). I marcatori di malattia del siero misurati con il metodo convenzionale saranno serviti come riferimento e confrontati con i campioni di DBS in diversi punti temporali. Saranno raccolti 30 pazienti per convalidare la correlazione tra il livello dei marcatori sierici e della DBS.

Fase II - Studio pilota Nello studio pilota, miriamo a sviluppare un metodo dry blood spot per lo screening della colestasi neonatale. I bambini con malattia da colestasi neonatale precedentemente diagnosticata presso il Dipartimento di Pediatria, National Taiwan University Children's Hospital dal 2007 o i bambini di nuova diagnosi saranno reclutati in modo retrospettivo dalla revisione dei grafici. Pazienti con iperbilirubinemia di tipo indiretto e neonati sani saranno arruolati come controllo. Analizzeremo la colestasi neonatale e controlleremo il test di screening delle macchie di sangue secco dei pazienti dopo la nascita per quantificare il livello dei marcatori di malattia. L'analisi della curva ROC sarà condotta sulla quantità di bilirubina per trovare il miglior cutoff per lo screening della colestasi neonatale. La dimensione del campione dello studio caso e controllo è di 20 casi e 20 controlli.