Kis DNS-vírus által kódolt onkogének vizsgálata víruskarcinogenezisben laboratóriumi modellrendszerek segítségével

Tantárgyak:

1. Bevételi kritériumok:

   • Életkor: 18-65 év.
   • A rutin szűréssel diagnosztizált HPV-pozitív nők. Nők, akik hajlandóak részt venni a vizsgálatban és aláírni egy tájékozott beleegyező nyilatkozatot

2. Kizárási kritériumok:

   • Korhatárok (18 évnél fiatalabb vagy 65 év felettiek).
   • Immunrendszerű betegek, szteroid- vagy kemoterápiában részesülő betegek, vagy olyan súlyos egészségügyi betegségben szenvedő betegek, akik befolyásolhatják immunrendszerüket.
   • Ismeretlen kórtörténet.

   Tanulmányi csoportok:

   • 1. csoport (esetek): Bármilyen mértékű rosszindulatú daganatos méhnyakrákban szenvedő betegek (rutin szűréssel vagy bármilyen más diagnosztikai vizsgálattal diagnosztizálták)
   • 2. csoport (kontroll): Nők, akik ugyanazokkal a felvételi és kizárási kritériumokkal rendelkeznek, de nem ismert, hogy méhnyakrákjuk van.

   A tanulmány célja:

   1. A HPV mint kis DNS-vírusok példájának vizsgálata a sejttranszformációban és a karcinogenezisben.
   2. A legtöbb HPV genotípus meghatározása, amelyek a méhnyakrák előfordulásának magas kockázatával járnak.
   3. A sejttranszformációban és a rosszindulatú daganatokban szerepet játszó HPV onkogének kimutatása.

   4. A virális DNS-integráció szerepének tanulmányozása a sejttranszformációban és a karcinogenezisben.

      Tanulmányi módszerek:

      Mintagyűjtés és tárolás:

      • A mintákat a méhnyakból ecsettel vagy tamponnal veszik\ a gyűjtőeszköz típusának megfelelő utasításokat követve.

      • A gyűjtőcsöveket szobahőmérsékleten (15-30 °C) kell tárolni.

      • A mintákat a gyűjtést követő 14 napon belül elküldik a laboratóriumba
      • A csövek szobahőmérsékleten 2-3 hétig eltarthatók.

      HPV kimutatás:

      • A HPV nem szaporítható szövettenyészetben, ezért a legtöbb esetben a pontos azonosítása molekuláris biológiai technikákon, például polimeráz láncreakción (PCR) támaszkodik.

      HPV genotipizálás:

      • A PCR-RFLP jó megkülönböztető képességet mutat a HR és LR HPV genotípusok megkülönböztetésével, és lehetővé teszi az egyszeri vagy többszörös fertőzések azonosítását.

      • Ebben a technikában az amplifikált DNS-t restrikciós enzimek emésztik, ami különböző hosszúságú DNS-fragmenseket eredményez. Minden fragmentum hossza egy bizonyos HPV genotípusra jellemző.

      • A leggyakoribb restrikciós enzimek a BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI és RsaI.

      HPV onkogének és onkoproteinek:

      • Az E6/E7 onkogének mRNS kimutatására használt fő technikák két kereskedelmi teszt: PreTectW Proofer és APTIMAW HPV Assay. Ezek a technikák a teljes hosszúságú E6/E7 transzkriptumok transzkripció által közvetített amplifikációján alapulnak PCR segítségével.

      Statisztikai analízis:

      • Az adatok elemzése egyirányú varianciaanalízissel történik az SPSS szoftver 24.0-s verziójával. Az értékeket átlag ± S.D formában fejezzük ki. A két csoport összehasonlításához Student-féle t-tesztet használunk annak meghatározására, hogy az esetek szignifikánsan különböztek-e a kontrolltól. A különbségek statisztikailag szignifikánsnak tekintendők P<0,05, míg P<0,01 szignifikánsabb változást jelent.