Estudios de oncogenes codificados por virus de ADN pequeño en la carcinogénesis viral utilizando sistemas modelo de laboratorio

Materias de estudio:

1. Criterios de inclusión:

   • Edad: 18 - 65 años.
   • Mujeres que son positivas para el VPH diagnosticadas mediante exámenes de rutina. Mujeres dispuestas a participar en el estudio y firmar un consentimiento informado

2. Criterio de exclusión:

   • Extremos de edad (menos de 18 años o más de 65 años).
   • Pacientes inmunocomprometidos, pacientes bajo terapia con esteroides o quimioterapia, o pacientes con enfermedades médicas graves que puedan afectar su sistema inmunológico.
   • Antecedentes médicos desconocidos.

   Grupos de estudio:

   • Grupo 1 (Casos): Pacientes que se sabe que tienen cáncer de cuello uterino con cualquier grado de malignidad (diagnosticadas mediante exámenes de detección de rutina o cualquier otra prueba de diagnóstico)
   • Grupo 2 (Controles): Mujeres que comparten los mismos criterios de inclusión y exclusión, pero no se sabe que tengan cáncer de cuello uterino

   Objetivo del estudio:

   1. Estudiar el papel del VPH como ejemplo de pequeños virus de ADN en la transformación celular y la carcinogénesis.
   2. Determinar la mayoría de los genotipos de VPH asociados con un alto riesgo de aparición de cáncer de cuello uterino.
   3. Detección de los oncogenes del VPH que desempeñan un papel en la transformación celular y la malignidad.

   4. Estudiar el papel de la integración del ADN viral en la transformación celular y la carcinogénesis.

      Métodos de estudio:

      Recolección y almacenamiento de muestras:

      • Las muestras se obtendrán del cuello uterino con el cepillo o hisopo\ siguiendo las instrucciones correspondientes al tipo de dispositivo de recolección.

      • Los tubos de recolección se almacenarán a temperatura ambiente (15-30 °C).

      • Las muestras se enviarán al laboratorio en un plazo inferior a 14 días desde su recogida
      • Los tubos se pueden conservar durante 2-3 semanas a temperatura ambiente.

      Detección de VPH:

      • El VPH no se puede propagar en cultivo de tejidos y, por lo tanto, en la mayoría de los casos su identificación precisa se basa en técnicas de biología molecular, como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

      Genotipado de VPH:

      • PCR-RFLP muestra un buen poder discriminatorio al diferenciar entre los genotipos de VPH HR y LR, y es posible identificar infecciones únicas o múltiples.

      • En esta técnica, el ADN amplificado es digerido por enzimas de restricción, dando como resultado fragmentos de ADN de varias longitudes. La longitud de cada fragmento es característica de un determinado genotipo de VPH.

      • Las enzimas de restricción más comunes son BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI y RsaI.

      Oncogenes y oncoproteínas del VPH:

      • Las principales técnicas utilizadas para detectar el ARNm de los oncogenes E6/E7 son dos ensayos comerciales: PreTectW Proofer y APTIMAW HPV Assay. Estas técnicas se basan en la amplificación mediada por transcripción de transcritos completos de E6/E7 mediante PCR.

      Análisis estadístico:

      • Los datos se analizarán mediante análisis de varianza unidireccional utilizando el software SPSS versión 24.0. Los valores se expresarán como media ± S.D. Para la comparación entre 2 grupos, se utilizará la prueba t de Student para determinar si los casos fueron significativamente diferentes del control. Las diferencias se considerarán estadísticamente significativas en P<0,05, mientras que P<0,01 representará un cambio más significativo.