Studien zu kleinen DNA-Virus-kodierten Onkogenen bei der viralen Karzinogenese unter Verwendung von Labormodellsystemen

Studienfächer:

1. Einschlusskriterien:

   • Alter: 18 - 65 Jahre alt.
   • Frauen, die positiv auf HPV getestet wurden und durch Routineuntersuchungen diagnostiziert wurden. Frauen, die bereit sind, an der Studie teilzunehmen und eine Einverständniserklärung unterschreiben

2. Ausschlusskriterien:

   • Altersextreme (unter 18 Jahre oder über 65 Jahre).
   • Patienten mit geschwächtem Immunsystem, Patienten unter Steroidtherapie oder Chemotherapie oder Patienten mit schweren medizinischen Erkrankungen, die ihr Immunsystem beeinträchtigen könnten.
   • Unbekannte Krankengeschichte.

   Studiengruppen:

   • Gruppe 1 (Fälle): Patienten, von denen bekannt ist, dass sie Gebärmutterhalskrebs mit einem beliebigen Malignitätsgrad haben (diagnostiziert durch routinemäßiges Screening oder andere diagnostische Tests)
   • Gruppe 2 (Kontrollen): Frauen, die die gleichen Einschluss- und Ausschlusskriterien aufweisen, von denen jedoch nicht bekannt ist, dass sie Gebärmutterhalskrebs haben

   Ziel der Studie:

   1. Untersuchung der Rolle von HPV als Beispiel für kleine DNA-Viren bei der Zelltransformation und Karzinogenese.
   2. Bestimmung der meisten HPV-Genotypen, die mit einem hohen Risiko für das Auftreten von Gebärmutterhalskrebs verbunden sind.
   3. Nachweis der HPV-Onkogene, die eine Rolle bei Zelltransformation und Malignität spielen.

   4. Untersuchung der Rolle der viralen DNA-Integration bei der zellulären Transformation und Karzinogenese.

      Studienmethoden:

      Probenentnahme und -aufbewahrung:

      • Proben werden aus dem Gebärmutterhals mit der Bürste oder dem Tupfer entnommen, indem die Anweisungen für den Typ des Entnahmegeräts befolgt werden.

      • Entnahmeröhrchen werden bei Raumtemperatur (15-30 °C) gelagert.

      • Die Proben werden in weniger als 14 Tagen nach der Entnahme an das Labor gesendet
      • Die Röhrchen sind bei Raumtemperatur 2-3 Wochen haltbar.

      HPV-Nachweis:

      • HPV kann nicht in Gewebekultur vermehrt werden, und daher beruht seine genaue Identifizierung in den meisten Fällen auf molekularbiologischen Techniken, wie z. B. der Polymerase-Kettenreaktion (PCR).

      HPV-Genotypisierung:

      • PCR-RFLP zeigt eine gute Unterscheidungskraft, indem es zwischen HR- und LR-HPV-Genotypen unterscheidet, und es ist möglich, einzelne oder multiple Infektionen zu identifizieren .

      • Bei dieser Technik wird die amplifizierte DNA durch Restriktionsenzyme verdaut, was zu DNA-Fragmenten unterschiedlicher Länge führt. Jede Fragmentlänge ist charakteristisch für einen bestimmten HPV-Genotyp.

      • Die gebräuchlichsten Restriktionsenzyme sind BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI und RsaI.

      HPV-Onkogene und Onkoproteine:

      • Die wichtigsten Techniken zum Nachweis von mRNA für E6/E7-Onkogene sind zwei kommerzielle Assays: PreTectW Proofer und APTIMAW HPV Assay. Diese Techniken basieren auf der transkriptionsvermittelten Amplifikation von E6/E7-Transkripten voller Länge unter Verwendung von PCR.

      Statistische Analyse:

      • Die Daten werden durch eine Einweg-Varianzanalyse unter Verwendung der SPSS-Softwareversion 24.0 analysiert. Die Werte werden als Mittelwert ± S.D. ausgedrückt. Zum Vergleich zwischen zwei Gruppen wird der Student-t-Test verwendet, um zu bestimmen, ob sich die Fälle signifikant von der Kontrolle unterschieden. Unterschiede werden bei P < 0,05 als statistisch signifikant angesehen, während P < 0,01 eine signifikantere Änderung darstellt.