Pienen DNA-viruksen koodaamien onkogeenien tutkimukset viruksen karsinogeneesissä käyttäen laboratoriomallijärjestelmiä

Opiskeluaineet:

1. Sisällyttämiskriteerit:

   • Ikä: 18-65 vuotta.
   • Naiset, joilla on rutiiniseulonnalla diagnosoitu HPV-positiivinen. Naiset, jotka haluavat osallistua tutkimukseen ja allekirjoittaa tietoisen suostumuksen

2. Poissulkemiskriteerit:

   • Ikärajat (alle 18 vuotta vanha tai yli 65 vuotta vanha).
   • Potilaat, joilla on immuunijärjestelmä, steroidihoitoa tai kemoterapiaa saavat potilaat tai potilaat, joilla on vakava lääketieteellinen sairaus, joka voi vaikuttaa heidän immuunijärjestelmäänsä.
   • Tuntematon sairaushistoria.

   Opintoryhmät:

   • Ryhmä 1 (tapaukset): Potilaat, joilla tiedetään olevan kohdunkaulan syöpä, jolla on minkä tahansa asteinen pahanlaatuisuus (diagnoosoitu rutiiniseulonnalla tai muilla diagnostisilla testeillä)
   • Ryhmä 2 (kontrollit): Naiset, joilla on samat sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerit, mutta joilla ei tiedetä olevan kohdunkaulasyöpä

   Tutkimuksen tavoite:

   1. HPV:n roolin tutkiminen esimerkkinä pienistä DNA-viruksista solujen transformaatiossa ja karsinogeneesissä.
   2. Selvitetään useimmat HPV-genotyypit, jotka liittyvät suuriin kohdunkaulan syövän riskiin.
   3. Sellaisten HPV-onkogeenien havaitseminen, jotka osallistuvat solujen transformaatioon ja pahanlaatuisuuteen.

   4. Viruksen DNA-integraation roolin tutkiminen solujen transformaatiossa ja karsinogeneesissä.

      Opiskelumenetelmät:

      Näytteiden keräys ja säilytys:

      • Näytteet otetaan kohdunkaulasta harjalla tai vanupuikolla\ noudattamalla keräyslaitteen tyyppiä vastaavia ohjeita.

      • Keräysputket säilytetään huoneenlämmössä (15-30 °C).

      • Näytteet lähetetään laboratorioon alle 14 päivän kuluessa keräämisestä
      • Putket säilyvät huoneenlämmössä 2-3 viikkoa.

      HPV-tunnistus:

      • HPV:tä ei voida lisätä kudosviljelmässä, ja siksi sen tarkka tunnistaminen perustuu useimmissa tapauksissa molekyylibiologian tekniikoihin, kuten polymeraasiketjureaktioon (PCR).

      HPV genotyypitys:

      • PCR-RFLP osoittaa hyvää erottelukykyä erottamalla HR- ja LR-HPV-genotyypit, ja on mahdollista tunnistaa yksi tai useampi infektio.

      • Tässä tekniikassa monistettu DNA pilkotaan restriktioentsyymeillä, jolloin saadaan eripituisia DNA-fragmentteja. Jokainen fragmentin pituus on ominaista tietylle HPV-genotyypille.

      • Yleisimmät restriktioentsyymit ovat BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI ja RsaI.

      HPV onkogeenit ja onkoproteiinit:

      • Tärkeimmät tekniikat mRNA:n havaitsemiseen E6/E7-onkogeeneille ovat kaksi kaupallista määritystä: PreTectW Proofer ja APTIMAW HPV Assay. Nämä tekniikat perustuvat täyspitkien E6/E7-transkriptien transkriptiovälitteiseen monistukseen PCR:ää käyttäen.

      Tilastollinen analyysi:

      • Tiedot analysoidaan yksisuuntaisella varianssianalyysillä käyttäen SPSS-ohjelmiston versiota 24.0. Arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± S.D. Kahden ryhmän vertailua varten käytetään Studentin t-testiä sen määrittämiseksi, erosivatko tapaukset merkittävästi kontrollista. Erot katsotaan tilastollisesti merkitseviksi, kun P < 0,05, kun taas P < 0,01 edustaa merkittävämpää muutosta.