Studier av små DNA-viruskodede onkogener i viral karsinogenese ved bruk av laboratoriemodellsystemer

Studieemner:

1. Inklusjonskriterier:

   • Alder: 18 - 65 år.
   • Kvinner som er positive for HPV diagnostisert ved rutinemessig screening. Kvinner som er villige til å delta i studien og signere et informert samtykke

2. Ekskluderingskriterier:

   • Aldersgrense (mindre enn 18 år eller mer enn 65 år).
   • Immunologiske pasienter, pasienter under steroidbehandling eller kjemoterapi, eller pasienter med alvorlig medisinsk sykdom som kan påvirke immunsystemet deres.
   • Ukjent sykehistorie.

   Studiegrupper:

   • Gruppe 1 (tilfeller): Pasienter kjent for å ha livmorhalskreft med en hvilken som helst grad av malignitet (diagnostisert ved rutinescreening eller andre diagnostiske tester)
   • Gruppe 2 (kontroller): Kvinner som deler de samme inkluderings- og eksklusjonskriteriene, men ikke kjent for å ha kreft i livmorhalsen

   Målet med studien:

   1. Studerer rollen til HPV som et eksempel på små DNA-virus i celletransformasjon og karsinogenese.
   2. Bestemme de fleste HPV-genotypene assosiert med høy risiko for forekomst av livmorhalskreft.
   3. Påvisning av HPV-onkogenene som spiller rolle celletransformasjon og malignitet.

   4. Studerer rollen til viral DNA-integrasjon i cellulær transformasjon og karsinogenese.

      Studiemetoder:

      Samling og lagring av prøver:

      • Prøver vil bli tatt fra livmorhalsen med børsten eller vattpinnen\ ved å følge instruksjonene som tilsvarer typen oppsamlingsanordning.

      • Oppsamlingsrør oppbevares i romtemperatur (15-30 °C).

      • Prøver vil bli sendt til laboratoriet innen 14 dager etter innsamling
      • Rørene kan oppbevares i 2-3 uker ved romtemperatur.

      HPV-deteksjon:

      • HPV kan ikke forplantes i vevskultur, og derfor er nøyaktig identifisering i de fleste tilfeller avhengig av molekylærbiologiske teknikker, for eksempel polymerasekjedereaksjon (PCR).

      HPV-genotyping:

      • PCR-RFLP viser god diskriminerende kraft ved å skille mellom HR- og LR HPV-genotyper, og det er mulig å identifisere enkelt- eller multiple infeksjoner.

      • I denne teknikken fordøyes det amplifiserte DNAet av restriksjonsenzymer, noe som resulterer i DNA-fragmenter av forskjellige lengder. Hver fragmentlengde er karakteristisk for en viss HPV-genotype.

      • De vanligste restriksjonsenzymene er BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI og RsaI.

      HPV onkogener og onkoproteiner:

      • Hovedteknikkene som brukes til å påvise mRNA for E6/E7-onkogener er to kommersielle analyser: PreTectW Proofer og APTIMAW HPV-analyse. Disse teknikkene er basert på transkripsjonsmediert amplifikasjon av E6/E7-transkripter i full lengde ved bruk av PCR.

      Statistisk analyse:

      • Data vil bli analysert ved enveis variansanalyse ved bruk av SPSS programvareversjon 24.0. Verdier vil bli uttrykt som gjennomsnitt ± S.D. For sammenligning mellom 2 grupper vil Students t-test bli brukt for å fastslå om tilfellene var signifikant forskjellig fra kontrollen. Forskjeller vil bli vurdert som statistisk signifikante ved P<0,05, mens P<0,01 vil representere mer signifikant endring.