Undersøgelser af små DNA-virus-kodede onkogener i viral carcinogenese ved hjælp af laboratoriemodelsystemer

Studiefag:

1. Inklusionskriterier:

   • Alder: 18 - 65 år.
   • Kvinder, der er positive for HPV diagnosticeret ved rutinemæssig screening. Kvinder, der er villige til at deltage i undersøgelsen og underskrive et informeret samtykke

2. Eksklusionskriterier:

   • Aldersgrænser (mindre end 18 år eller mere end 65 år).
   • Patienter med immunforsvar, patienter under steroidbehandling eller kemoterapi eller patienter med alvorlig medicinsk sygdom, der kan påvirke deres immunsystem.
   • Ukendt sygehistorie.

   Studiegrupper:

   • Gruppe 1 (tilfælde): Patienter, der vides at have kræft i livmoderhalsen med en hvilken som helst grad af malignitet (diagnosticeret ved rutinescreening eller andre diagnostiske tests)
   • Gruppe 2 (Kontrol): Kvinder, der deler de samme inklusions- og eksklusionskriterier, men ikke kendt for at have kræft i livmoderhalsen

   Formålet med undersøgelsen:

   1. Undersøgelse af HPV's rolle som et eksempel på små DNA-vira i celletransformation og carcinogenese.
   2. Bestemmelse af de fleste HPV-genotyper forbundet med høj risiko for forekomst af livmoderhalskræft.
   3. Påvisning af HPV-onkogener, der spiller rolle celletransformation og malignitet.

   4. At studere rollen af ​​viral DNA-integration i cellulær transformation og carcinogenese.

      Undersøgelsesmetoder:

      Indsamling og opbevaring af prøver:

      • Prøver vil blive taget fra livmoderhalsen med børsten eller vatpinden\ ved at følge instruktionerne, der svarer til typen af ​​opsamlingsanordning.

      • Opsamlingsrør vil blive opbevaret ved stuetemperatur (15-30 °C).

      • Prøver vil blive sendt til laboratoriet inden for 14 dage efter indsamling
      • Rørene kan opbevares i 2-3 uger ved stuetemperatur.

      HPV-detektion:

      • HPV kan ikke formeres i vævskultur, og derfor er dets nøjagtige identifikation i de fleste tilfælde afhængig af molekylærbiologiske teknikker, såsom polymerasekædereaktion (PCR).

      HPV genotypning:

      • PCR-RFLP viser god diskriminerende kraft ved at differentiere mellem HR- og LR HPV-genotyper, og det er muligt at identificere enkelt- eller multiple infektioner.

      • I denne teknik fordøjes det amplificerede DNA af restriktionsenzymer, hvilket resulterer i DNA-fragmenter af forskellig længde. Hver fragmentlængde er karakteristisk for en bestemt HPV-genotype.

      • De mest almindelige restriktionsenzymer er BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI og RsaI.

      HPV onkogener og onkoproteiner:

      • De vigtigste teknikker, der bruges til at påvise mRNA for E6/E7-onkogener, er to kommercielle assays: PreTectW Proofer og APTIMAW HPV-assay. Disse teknikker er baseret på transkriptionsmedieret amplifikation af fuldlængde E6/E7-transkripter under anvendelse af PCR.

      Statistisk analyse:

      • Data vil blive analyseret ved en-vejs variansanalyse ved brug af SPSS software version 24.0. Værdier vil blive udtrykt som middel ± S.D. Til sammenligning mellem 2 grupper vil Students t-test blive brugt til at bestemme, om tilfældene var signifikant forskellige fra kontrollen. Forskelle vil blive betragtet som statistisk signifikante ved P<0,05, mens P<0,01 vil repræsentere mere signifikant ændring.