Études d'oncogènes codés par de petits virus à ADN dans la cancérogenèse virale à l'aide de systèmes modèles de laboratoire

Sujets d'étude :

1. Critère d'intégration:

   • Âge : 18 - 65 ans.
   • Femmes séropositives pour le VPH diagnostiquées par un dépistage de routine. Femmes souhaitant participer à l'étude et signer un consentement éclairé

2. Critère d'exclusion:

   • Âge extrême (moins de 18 ans ou plus de 65 ans).
   • Patients immunodéprimés, patients sous corticothérapie ou chimiothérapie, ou patients souffrant d'une maladie grave pouvant affecter leur système immunitaire.
   • Antécédents médicaux inconnus.

   Groupes d'étude :

   • Groupe 1 (Cas) : Patients connus pour avoir un cancer du col de l'utérus avec n'importe quel degré de malignité (diagnostiqué par un dépistage de routine ou tout autre test de diagnostic)
   • Groupe 2 (témoins) : femmes partageant les mêmes critères d'inclusion et d'exclusion, mais dont on ne sait pas qu'elles ont un cancer du col de l'utérus

   Le but de l'étude:

   1. Étudier le rôle du VPH comme exemple de petits virus à ADN dans la transformation cellulaire et la carcinogenèse.
   2. Déterminer la plupart des génotypes de VPH associés à des risques élevés de survenue d'un cancer du col de l'utérus.
   3. Détection des oncogènes HPV jouant le rôle de transformation cellulaire et de malignité.

   4. Etude du rôle de l'intégration de l'ADN viral dans la transformation cellulaire et la carcinogenèse.

      Méthodes d'étude :

      Prélèvement et stockage des échantillons :

      • Les échantillons seront prélevés du col de l'utérus avec la brosse ou l'écouvillon\ en suivant les instructions correspondant au type de dispositif de prélèvement.

      • Les tubes de prélèvement seront conservés à température ambiante (15-30 °C).

      • Les échantillons seront envoyés au laboratoire en moins de 14 jours après le prélèvement
      • Les tubes peuvent être conservés 2 à 3 semaines à température ambiante.

      Détection VPH :

      • Le VPH ne peut pas être propagé en culture tissulaire et, par conséquent, dans la plupart des cas, son identification précise repose sur des techniques de biologie moléculaire, telles que la réaction en chaîne par polymérase (PCR).

      Génotypage du VPH :

      • La PCR-RFLP montre un bon pouvoir discriminant en différenciant les génotypes HPV HR et LR, et il est possible d'identifier des infections simples ou multiples .

      • Dans cette technique, l'ADN amplifié est digéré par des enzymes de restriction, ce qui donne des fragments d'ADN de différentes longueurs. Chaque longueur de fragment est caractéristique d'un certain génotype de HPV.

      • Les enzymes de restriction les plus courantes sont BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI et RsaI.

      Oncogènes et oncoprotéines du VPH :

      • Les principales techniques utilisées pour détecter l'ARNm des oncogènes E6/E7 sont deux tests commerciaux : PreTectW Proofer et APTIMAW HPV Assay. Ces techniques sont basées sur l'amplification médiée par la transcription de transcrits E6/E7 pleine longueur par PCR.

      Analyses statistiques:

      • Les données seront analysées par une analyse de variance unidirectionnelle à l'aide du logiciel SPSS version 24.0. Les valeurs seront exprimées en moyenne ± S.D. Pour la comparaison entre 2 groupes, le test t de Student sera utilisé pour déterminer si les cas étaient significativement différents du contrôle. Les différences seront considérées comme statistiquement significatives à P<0,05, tandis que P<0,01 représentera un changement plus significatif.