Studier av små DNA-viruskodade onkogener i viral karcinogenes med hjälp av laboratoriemodellsystem

Studieämnen:

1. Inklusionskriterier:

   • Ålder: 18-65 år.
   • Kvinnor som är positiva för HPV diagnostiseras genom rutinscreening. Kvinnor som är villiga att delta i studien och underteckna ett informerat samtycke

2. Exklusions kriterier:

   • Åldersextrema (mindre än 18 år eller äldre än 65 år).
   • Patienter med immunförsvar, patienter under steroidbehandling eller kemoterapi, eller patienter med allvarlig medicinsk sjukdom som kan påverka deras immunförsvar.
   • Okänd sjukdomshistoria.

   Studiegrupper:

   • Grupp 1 (fall): Patienter som är kända för att ha cancer i livmoderhalsen med någon grad av malignitet (diagnostiserats genom rutinscreening eller andra diagnostiska tester)
   • Grupp 2 (kontroller): Kvinnor som delar samma inklusions- och uteslutningskriterier, men som inte är kända för att ha cancer i livmoderhalsen

   Syfte med studien:

   1. Studier av HPV:s roll som ett exempel på små DNA-virus i celltransformation och karcinogenes.
   2. Att bestämma de flesta HPV-genotyper som är associerade med höga risker för cancer i livmoderhalsen.
   3. Detektion av HPV-onkogener som spelar roll för celltransformation och malignitet.

   4. Studera rollen av viral DNA-integration i cellulär transformation och karcinogenes.

      Studiemetoder:

      Provinsamling och förvaring:

      • Prover kommer att tas från livmoderhalsen med borsten eller pinnen\ genom att följa instruktionerna som motsvarar typen av uppsamlingsanordning.

      • Uppsamlingsrör kommer att förvaras i rumstemperatur (15-30 °C).

      • Proverna kommer att skickas till laboratoriet inom mindre än 14 dagar efter insamling
      • Rören kan bevaras i 2-3 veckor i rumstemperatur.

      HPV-detektering:

      • HPV kan inte förökas i vävnadsodling, och därför bygger dess exakta identifiering i de flesta fall på molekylärbiologiska tekniker, såsom polymeraskedjereaktion (PCR).

      HPV genotypning:

      • PCR-RFLP visar god diskriminerande kraft genom att skilja mellan HR- och LR HPV-genotyper, och det är möjligt att identifiera enstaka eller flera infektioner.

      • I denna teknik spjälkas det amplifierade DNA:t av restriktionsenzymer, vilket resulterar i DNA-fragment av olika längder. Varje fragmentlängd är karakteristisk för en viss HPV-genotyp.

      • De vanligaste restriktionsenzymerna är BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI och RsaI.

      HPV-onkogener och onkoproteiner:

      • De huvudsakliga teknikerna som används för att detektera mRNA för E6/E7-onkogener är två kommersiella analyser: PreTectW Proofer och APTIMAW HPV-analys. Dessa tekniker är baserade på transkriptionsmedierad amplifiering av fullängds E6/E7-transkript med användning av PCR.

      Statistisk analys:

      • Data kommer att analyseras genom envägsanalys av varians med SPSS-programversion 24.0. Värden kommer att uttryckas som medelvärde ± S.D. För jämförelse mellan 2 grupper kommer Students t-test att användas för att fastställa om fallen skilde sig signifikant från kontrollen. Skillnader kommer att betraktas som statistiskt signifikanta vid P<0,05, medan P<0,01 kommer att representera en mer signifikant förändring.