Studie malých DNA virů kódovaných onkogenů ve virové karcinogenezi pomocí laboratorních modelových systémů

Studijní předměty:

1. Kritéria pro zařazení:

   • Věk: 18 - 65 let.
   • Ženy, které jsou pozitivní na HPV diagnostikované rutinním screeningem. Ženy ochotné zúčastnit se studie a podepsat informovaný souhlas

2. Kritéria vyloučení:

   • Věkové extrémy (méně než 18 let nebo více než 65 let).
   • Imunitní pacienti, pacienti podstupující steroidní terapii nebo chemoterapii nebo pacienti se závažným zdravotním onemocněním, které by mohlo ovlivnit jejich imunitní systém.
   • Neznámá anamnéza.

   Studijní skupiny:

   • Skupina 1 (Případy): Pacienti, o kterých je známo, že mají rakovinu děložního čípku s jakýmkoli stupněm malignity (diagnostikovaná rutinním screeningem nebo jinými diagnostickými testy)
   • Skupina 2 (kontrolní): Ženy sdílející stejná kritéria pro zařazení a vyloučení, ale není známo, že mají rakovinu děložního čípku

   Cíl studie:

   1. Studium role HPV jako příkladu malých DNA virů v buněčné transformaci a karcinogenezi.
   2. Určení většiny genotypů HPV spojených s vysokým rizikem výskytu rakoviny děložního čípku.
   3. Detekce HPV onkogenů hrajících roli při transformaci buněk a malignitě.

   4. Studium role integrace virové DNA v buněčné transformaci a karcinogenezi.

      Studijní metody:

      Sběr a skladování vzorků:

      • Vzorky budou odebrány z děložního čípku kartáčkem nebo tamponem podle pokynů odpovídajících typu odběrového zařízení.

      • Odběrové zkumavky budou skladovány při pokojové teplotě (15-30 °C).

      • Vzorky budou odeslány do laboratoře do 14 dnů po odběru
      • Zkumavky lze uchovávat 2-3 týdny při pokojové teplotě.

      Detekce HPV:

      • HPV nelze propagovat v tkáňové kultuře, a proto se jeho přesná identifikace ve většině případů opírá o techniky molekulární biologie, jako je polymerázová řetězová reakce (PCR).

      Genotypizace HPV:

      • PCR-RFLP vykazuje dobrou rozlišovací schopnost tím, že rozlišuje mezi genotypy HR a LR HPV a je možné identifikovat jednu nebo více infekcí.

      • Při této technice je amplifikovaná DNA štěpena restrikčními enzymy, což vede k fragmentům DNA různých délek. Každá délka fragmentu je charakteristická pro určitý genotyp HPV.

      • Nejběžnější restrikční enzymy jsou BamHI, Dd6el, HaeIII, Hinfl, PstI a Rsal.

      HPV onkogeny a onkoproteiny:

      • Hlavní techniky používané k detekci mRNA pro onkogeny E6/E7 jsou dva komerční testy: PreTectW Proofer a APTIMAW HPV Assay. Tyto techniky jsou založeny na transkripcí zprostředkované amplifikaci transkriptů E6/E7 plné délky pomocí PCR.

      Statistická analýza:

      • Data budou analyzována jednosměrnou analýzou rozptylu pomocí softwaru SPSS verze 24.0. Hodnoty budou vyjádřeny jako průměr ± S.D. Pro srovnání mezi 2 skupinami bude použit Studentův t test, aby se zjistilo, zda se případy významně lišily od kontroly. Rozdíly budou považovány za statisticky významné při P<0,05, zatímco P<0,01 bude představovat významnější změnu.