Studi di oncogeni codificati da piccoli virus a DNA nella cancerogenesi virale utilizzando sistemi modello di laboratorio

Materie di studio:

1. Criterio di inclusione:

   • Età: 18 - 65 anni.
   • Donne che risultano positive all'HPV diagnosticato mediante screening di routine. Donne disposte a partecipare allo studio e firmare un consenso informato

2. Criteri di esclusione:

   • Età estrema (meno di 18 anni o più di 65 anni).
   • Pazienti immunocompresi, pazienti sottoposti a terapia steroidea o chemioterapia o pazienti con gravi malattie mediche che potrebbero influire sul loro sistema immunitario.
   • Storia medica sconosciuta.

   Gruppi di studio:

   • Gruppo 1 (Casi): Pazienti noti per avere il cancro della cervice con qualsiasi grado di malignità (diagnosticato mediante screening di routine o qualsiasi altro test diagnostico)
   • Gruppo 2 (Controlli): donne che condividono gli stessi criteri di inclusione ed esclusione, ma non sono note per avere il cancro della cervice

   Scopo dello studio:

   1. Studio del ruolo dell'HPV come esempio di piccoli virus a DNA nella trasformazione cellulare e nella carcinogenesi.
   2. Determinazione dei genotipi più HPV associati ad alti rischi di insorgenza del cancro della cervice.
   3. Rilevamento degli oncogeni dell'HPV che giocano un ruolo nella trasformazione cellulare e nella malignità.

   4. Studio del ruolo dell'integrazione del DNA virale nella trasformazione cellulare e nella carcinogenesi.

      Metodi di studio:

      Raccolta e conservazione dei campioni:

      • I campioni saranno prelevati dalla cervice con lo spazzolino o il tampone\ seguendo le istruzioni corrispondenti al tipo di dispositivo di raccolta.

      • Le provette di raccolta saranno conservate a temperatura ambiente (15-30 °C).

      • I campioni verranno inviati al laboratorio entro 14 giorni dal prelievo
      • I tubi si conservano per 2-3 settimane a temperatura ambiente.

      Rilevamento dell'HPV:

      • L'HPV non può essere propagato nella coltura tissutale e, pertanto, nella maggior parte dei casi la sua identificazione accurata si basa su tecniche di biologia molecolare, come la reazione a catena della polimerasi (PCR).

      Genotipizzazione dell'HPV:

      • La PCR-RFLP mostra un buon potere discriminatorio differenziando tra i genotipi HPV HR e LR ed è possibile identificare infezioni singole o multiple .

      • In questa tecnica, il DNA amplificato viene digerito dagli enzimi di restrizione, producendo frammenti di DNA di varie lunghezze. Ogni lunghezza del frammento è caratteristica di un certo genotipo di HPV.

      • Gli enzimi di restrizione più comuni sono BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI e RsaI.

      HPV oncogeni e oncoproteine:

      • Le principali tecniche utilizzate per rilevare l'mRNA per gli oncogeni E6/E7 sono due test commerciali: PreTectW Proofer e APTIMAW HPV Assay. Queste tecniche si basano sull'amplificazione mediata dalla trascrizione di trascritti E6/E7 a lunghezza intera mediante PCR.

      Analisi statistica:

      • I dati saranno analizzati mediante analisi della varianza unidirezionale utilizzando il software SPSS versione 24.0. I valori saranno espressi come media ± D.S. Per il confronto tra 2 gruppi, verrà utilizzato il test t di Student per determinare se i casi erano significativamente diversi dal controllo. Le differenze saranno considerate statisticamente significative a P<0,05, mentre P<0,01 rappresenterà un cambiamento più significativo.