Estudos de oncogenes codificados por pequenos vírus de DNA na carcinogênese viral usando sistemas de modelo de laboratório

Temas de estudo:

1. Critério de inclusão:

   • Idade: 18 - 65 anos.
   • Mulheres positivas para HPV diagnosticadas por triagem de rotina. Mulheres dispostas a participar do estudo e assinar um termo de consentimento informado

2. Critério de exclusão:

   • Extremos de idade (menos de 18 anos ou mais de 65 anos).
   • Pacientes imunocomprometidos, pacientes sob terapia com esteróides ou quimioterapia ou pacientes com doenças médicas graves que possam afetar seu sistema imunológico.
   • Histórico médico desconhecido.

   Grupos de estudo:

   • Grupo 1 (Casos): Pacientes com câncer do colo do útero com qualquer grau de malignidade (diagnosticado por triagem de rotina ou qualquer outro teste diagnóstico)
   • Grupo 2 (controles): mulheres que compartilham os mesmos critérios de inclusão e exclusão, mas não têm câncer cervical

   Objetivo do estudo:

   1. Estudar o papel do HPV como exemplo de pequenos vírus de DNA na transformação celular e na carcinogênese.
   2. Determinar a maioria dos genótipos de HPV associados a altos riscos de ocorrência de câncer de colo do útero.
   3. Detecção dos oncogenes do HPV desempenhando papel de transformação celular e malignidade.

   4. Estudar o papel da integração do DNA viral na transformação celular e na carcinogênese.

      Métodos de estudo:

      Coleta e armazenamento de amostras:

      • As amostras serão obtidas do colo do útero com a escova ou swab\ seguindo as instruções correspondentes ao tipo de dispositivo de coleta.

      • Os tubos de coleta serão armazenados em temperatura ambiente (15-30 °C).

      • As amostras serão enviadas ao laboratório em menos de 14 dias após a coleta
      • Os tubos podem ser preservados por 2-3 semanas em temperatura ambiente.

      Detecção de HPV:

      • O HPV não pode ser propagado em cultura de tecidos e, portanto, na maioria dos casos, sua identificação precisa depende de técnicas de biologia molecular, como a reação em cadeia da polimerase (PCR).

      Genotipagem do HPV:

      • O PCR-RFLP apresenta bom poder discriminatório ao diferenciar os genótipos de HPV HR e LR, sendo possível identificar infecções únicas ou múltiplas .

      • Nesta técnica, o DNA amplificado é digerido por enzimas de restrição, resultando em fragmentos de DNA de vários comprimentos. Cada comprimento de fragmento é característico de um certo genótipo de HPV.

      • As enzimas de restrição mais comuns são BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI e RsaI.

      Oncogenes e oncoproteínas do HPV:

      • As principais técnicas usadas para detectar mRNA para oncogenes E6/E7 são dois ensaios comerciais: PreTectW Proofer e APTIMAW HPV Assay. Essas técnicas são baseadas na amplificação mediada por transcrição de transcritos E6/E7 completos usando PCR.

      Análise estatística:

      • Os dados serão analisados ​​por análise de variância unidirecional usando o software SPSS versão 24.0. Os valores serão expressos como média ± S.D. Para comparação entre 2 grupos, o teste t de Student será usado para determinar se os casos foram significativamente diferentes do controle. As diferenças serão consideradas estatisticamente significativas em P<0,05, enquanto P<0,01 representará uma mudança mais significativa.