Valutare l'efficacia dei protocolli innescati da progestinici rispetto agli antagonisti del GnRH nelle donne vietnamite sottoposte a fecondazione in vitro

Materiali e metodo

Si trattava di uno studio controllato randomizzato in aperto condotto presso il Centro di riproduzione assistita del Tam Anh General Hospital. Lo studio mirava a stimare l'efficacia dell'intervento (protocollo PPOS) rispetto a un gruppo di controllo che riceveva un protocollo antagonista dell'ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH).

Stima della dimensione del campione

La procedura di stima della dimensione del campione è dettagliata nel protocollo dello studio. In breve, i ricercatori hanno condotto una simulazione che utilizzava il metodo di Cundill e Alexander (2015) con parametri derivati ​​dal profilo clinico di 804 pazienti sottoposte a stimolazione ovarica mediante due protocolli presso l'ospedale Tam Anh da gennaio a ottobre 2022. La procedura mirava a ottimizzare i test di non inferiorità sulla differenza nella quantità di ovociti recuperati tra due gruppi, stimata da una distribuzione binomiale negativa. Il risultato della simulazione indicava che sarebbe necessaria una dimensione totale del campione di 200 pazienti (n=100 per ciascun braccio di trattamento) per ottenere una potenza statistica di 0,8.

Reclutamento dei partecipanti allo studio

I pazienti infertili vengono per essere esaminati al Centro di riproduzione assistita dell'ospedale generale di Tam Anh, Hanoi, e al Centro di tecnologia di riproduzione assistita e innesto dell'Università medica di Hanoi. Nel processo di esame di base dell'infertilità presso l'ospedale, i medici prenderanno in considerazione i criteri inclusivi ed esclusivi del paziente. I medici contatteranno un membro del gruppo di ricerca se i criteri inclusivi sono soddisfatti. Un membro del gruppo di ricerca o un medico ospedaliero inviterà il paziente a partecipare, fornirà consulenza sulla procedura dello studio, sui vantaggi e sui rischi della partecipazione e risponderà a qualsiasi domanda del paziente. Se i pazienti accettano di partecipare, acconsentiranno a partecipare allo studio. Ciascun partecipante verrà assegnato in modo casuale al gruppo di trattamento utilizzando il protocollo PPOS o al gruppo di controllo utilizzando il regime GnRH-ant.

Metodo di trattamento

Protocolli di stimolazione ovarica

L'iperstimolazione ovarica controllata è iniziata il secondo giorno delle mestruazioni utilizzando l'ormone follicolo-stimolante ricombinante. Nel gruppo trattato con protocollo antagonista dell'ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH), la soppressione dell'ipofisi è iniziata il sesto giorno di stimolazione tramite la somministrazione giornaliera di 0,25 milligrammi di antagonisti del GnRH (ganirelix o cetrorelix). Nel gruppo con stimolazione ovarica innescata da progestinico (PPOS), 30 mg/giorno di didrogesterone sono stati iniziati dal giorno 2 del ciclo fino al giorno di attivazione.

Protocollo di laboratorio

I complessi ovocita-cumulo sono stati incubati per 2 ore in terreno G-IVF (Vitrolife) utilizzando incubatori da banco Origio per completare la maturazione nucleare. Dopo aver rimosso le cellule del cumulo, gli ovociti denudati sono stati valutati al microscopio invertito per convalidare il raggiungimento dello stato di metafase II, mentre sono stati esclusi gli ovociti degenerati, grandi o gravemente dismorfici. L'iniezione intracitoplasmatica dello sperma (ICSI) è stata eseguita 3-4 ore dopo il recupero da embriologi esperti. Gli zigoti risultanti sono stati coltivati ​​in terreno singolo continuo (Fujifilm Irvine Scientific) all'interno di incubatori tri-gas (37°C, 5% O2, 6% CO2) fino al giorno 3. Sono stati applicati criteri morfologici rigorosi, conservando solo due zigoti pronuclei normalmente fecondati ed eliminando embrioni multinucleari anomali. La qualità dello stadio di scissione è stata classificata a 67-69 ore secondo il consenso di Istanbul in base al numero di cellule, frammentazione, multinucleazione e uniformità. Il terzo giorno post-ICSI, gli embriologi hanno consigliato ai pazienti di effettuare la coltura della blastocisti piuttosto che la crioconservazione. La morfologia delle blastocisti è stata valutata utilizzando il sistema di classificazione Gardner e Schoolcraft e gli embrioni che soddisfacevano i criteri di 3-6 blastocisti AA/AB/BA o 1-2 embrioni AA/AB sono stati classificati come di buona qualità.