Vyhodnoťte účinnost progestinem aktivovaných proti GnRH antagonistických protokolů u vietnamských žen podstupujících oplodnění in vitro

Materiály a metoda

Jednalo se o otevřenou, randomizovanou kontrolovanou studii prováděnou v Centru asistované reprodukce v Tam Anh General Hospital. Cílem studie bylo odhadnout účinnost intervence (protokol PPOS) ve srovnání s kontrolní skupinou, která dostávala protokol antagonisty hormonu uvolňujícího gonadotropin (GnRH).

Odhad velikosti vzorku

Postup odhadu velikosti vzorku je podrobně popsán v protokolu studie. Stručně řečeno, vyšetřovatelé provedli simulaci, která implikovala metodu Cundilla a Alexandra (2015) s parametry odvozenými z klinického profilu 804 pacientek, které podstoupily stimulaci vaječníků dvěma protokoly v nemocnici Tam Anh od ledna do října 2022. Cílem postupu bylo optimalizovat testování non-inferiority na rozdílu v množství získaných oocytů mezi dvěma skupinami, odhadovaném pomocí negativní binomické distribuce. Výsledek simulace ukázal, že k dosažení statistické síly 0,8 by byla potřeba celková velikost vzorku 200 pacientů (n=100 pro každé léčebné rameno).

Nábor účastníků studie

Neplodné pacientky přicházejí na vyšetření do Centra asistované reprodukce Všeobecné nemocnice Tam Anh v Hanoji a Centra asistované reprodukce a technologie štěpů na Hanojské lékařské univerzitě. V základním procesu vyšetření neplodnosti v nemocnici budou lékaři zvažovat inkluzivní a exkluzivní kritéria pacienta. Pokud budou splněna inkluzivní kritéria, kliničtí lékaři budou kontaktovat člena výzkumného týmu. Člen výzkumného týmu nebo nemocniční lékař vyzve pacienta k účasti, poradí s postupem studie a výhodami a riziky účasti a zodpoví případné dotazy pacienta. Pokud pacienti souhlasí s účastí, budou souhlasit s účastí ve studii. Každý účastník bude náhodně zařazen do léčebné skupiny pomocí protokolu PPOS nebo do kontrolní skupiny pomocí režimu GnRH-ant.

Způsob léčby

Protokoly ovariální stimulace

Řízená ovariální hyperstimulace začala druhý den menstruace s využitím rekombinantního folikuly stimulujícího hormonu. Ve skupině s protokolem antagonisty hormonu uvolňujícího gonadotropin (GnRH) začala suprese hypofýzy šestý den stimulace denním podáváním 0,25 miligramu antagonisty GnRH (ganirelix nebo cetrorelix). Ve skupině progestinem primované ovariální stimulace (PPOS) bylo zahájeno 30 mg/den dydrogesteronu od 2. dne cyklu až do spouštěcího dne.

Laboratorní protokol

Komplexy oocyt-cumulus byly inkubovány po dobu 2 hodin v médiu G-IVF (Vitrolife) za použití stolních inkubátorů Origio k dokončení jaderného zrání. Po odstranění buněk kumulu byly obnažené oocyty hodnoceny pod inverzním mikroskopem, aby se potvrdilo dosažení stavu metafáze II, zatímco degenerované, velké nebo silně dysmorfní oocyty byly vyloučeny. Intracytoplazmatická injekce spermie (ICSI) byla provedena 3-4 hodiny po odběru zkušenými embryology. Výsledné zygoty byly kultivovány v kontinuálním jediném médiu (Fujifilm Irvine Scientific) v trojplynových inkubátorech (37 °C, 5 % O2, 6 % CO2) až do 3. dne. Byla uplatněna přísná morfologická kritéria, pouze se zachovaly normálně oplodněné dvě zygoty s pronukleem při eliminaci abnormální vícejaderná embrya. Kvalita stádia štěpení byla odstupňována po 67-69 hodinách podle Istanbulského konsenzu na základě počtu buněk, fragmentace, mnohojaderné a uniformity. Třetí den po ICSI embryologové radili pacientům, aby pokračovali v kultivaci blastocyst oproti kryoprezervaci. Morfologie blastocyst byla hodnocena pomocí Gardnerova a Schoolcraftova systému a embrya splňující kritéria 3-6 AA/AB/BA blastocyst nebo 1-2 AA/AB embrya byla klasifikována jako dobrá.