LUDEC 연구 - 자궁내막암 진단을 위한 자궁강 세척의 파일럿 연구 (LUDEC)

자궁 내막 암종(EC) - 자궁 내막의 암종 -은 서구 문명 국가에서 가장 흔한 부인과 악성 종양입니다. 미국에서만 매년 약 42,160건이 진단되고 7,780건의 사망이 발생합니다.

유형 I EC는 에스트로겐 의존적이며 에스트로겐 수치를 높이는 조건과 관련이 있습니다. 비정형 자궁내막 증식증인 전구 병변은 잘 설명되어 있습니다. Type I EC는 종종 자궁내막 조직학적으로 대부분의 경우 잘 구분되며 불규칙한 출혈로 인해 조기에 진단되기 때문에 좋은 예후를 보입니다.

유형 II EC는 에스트로겐 의존적이지 않으며 장액성 또는 투명 세포 조직학입니다. I형 암과는 대조적으로 대다수의 특히 장액성 암은 등급이 높고 폐경 후 여성에게 영향을 미치며 초기 증상을 일으키지 않고 진행된 단계에서 진단되며 상피성 난소암(EOC)과 유사하게 행동하며 매우 나쁜 예후. 자궁내막의 전구체 병변은 "장액성 자궁내막 상피내 암종"(SEIC)으로 지칭되며, 병변은 "장액성 난관 상피내 암종"(STIC)으로 불리는 난관 내 EOC의 전구체 병변과 매우 유사합니다.

불행하게도, II형 상피 EC를 가진 대부분의 환자, 특히 장액성 및 투명 세포 암종은 질병이 전이될 때까지 거의 또는 전혀 증상을 경험하지 않습니다. 초기 증상이 없고 질병을 조기에 발견할 수 있는 신뢰할 수 있는 선별 검사가 없기 때문에 여성은 질병이 자궁 너머로 확산되어 예후가 좋지 않은 후에 진단을 받게 됩니다. 이러한 이유로 유형 II EC의 조기 진단에 대한 명확한 의학적 필요성이 있습니다.

유형 I 및 유형 II 자궁 종양은 또한 병인 및/또는 진행의 기초가 되는 분자 변형의 다른 패턴을 갖는 것으로 보입니다(1). 종양 억제 유전자 PTEN의 변형, 미소부수체 불안정성 및 K-ras 변형은 I형 종양의 초기 발달과 관련이 있는 반면, 이러한 변형은 II형 암에서는 흔하지 않습니다. 한편, TP53 유전자의 돌연변이는 자궁 장액성 암종의 초기 병인에 중요한 것으로 보입니다. 더욱이, HER2 과발현/증폭은 유형 II 종양과 관련이 있습니다.

EC의 주요 증상인 불규칙 출혈은 일반적으로 "확장 및 소파술" 및 전신 마취 및 입원을 필요로 하는 다소 침습적인 절차인 자궁경 검사에 의해 조사됩니다. 이를 통해 초기 I형 및 일반적으로 자궁내막 암종을 진단할 수 있습니다. 장액성 제2형 EC의 출혈도 같은 방법으로 검사하지만 대개는 진단 당시 이미 질병이 진행된 상태이다.

상부 생식기의 악성 세포가 하부 생식기로 이동한다는 개념 증명은 최근 Kinde I. et al. (2). 액체 기반 자궁경부 세포검사는 세포학적 평가뿐만 아니라 DNA 수집도 가능합니다. 자궁내막암과 난소암에서 일반적으로 돌연변이되는 유전자 패널은 22개의 자궁내막암의 새로운 전체 엑솜 시퀀싱 데이터와 이전에 발표된 TP53 유전자의 돌연변이를 포함한 다른 종양 유형에 대한 데이터로 조립되었습니다. 이 패널은 24개의 자궁내막암과 22개의 난소암에서 돌연변이를 검색하는 데 사용되었으며 모든 46개 샘플에서 돌연변이를 식별했습니다. EOC 및 EC에 대한 가능한 스크리닝 테스트를 확립하기 위해 액체 세포진 검사를 통해 얻은 DNA에서 종양 세포를 검색했습니다. 민감한 대규모 병렬 시퀀싱 방법을 사용하면 자궁내막암의 100%(24/24)와 난소암의 41%(22/9)에서 액체 세포진 세포진 검사 표본의 DNA에서 동일한 돌연변이를 식별할 수 있었습니다.

EOC 검출을 위한 유망한 접근법은 Paul Speiser와 Robert Zeillinger(Molecular Oncology Group, Department of General Gynecology and Department of General Gynaecology and Department of Gynaecologic Oncology, Vienna of Medical University, Austria)에 의해 확립되었습니다. 이 접근법을 ALPINE 기술(난관 상피내 신생물 검출을 위한 오스트리아 세척 절차)이라고 합니다(원고 준비 중). 여기에는 자궁강 및 근위 나팔관의 세척과 전악성 및 악성 세포의 존재에 대한 이 세척액의 후속 분석이 포함됩니다.

연구자 기관에서 의심되는 난소 악성 종양에 대한 외과 개입 전에 자궁 세척액을 수집했습니다. 악성 종양이 확인된 후 Bert Vogelstein(Johns Hopkins University, Baltimore, USA) 그룹의 딥 시퀀싱을 통해 자궁내막암 및 난소암(아래 참조)에서 자주 발견되는 유전적 변화 패널을 22명의 난소암 환자의 세척 샘플에서 연구했습니다. . 난소암을 나타내는 유전적 변화의 존재는 16/22(~73%) 세척 표본에서 확인할 수 있었습니다.

이 파일럿 연구에서 EOC를 감지하는 민감도는 전례가 없으며 EOC 및 STIC라고 하는 EOC의 전구체 병변을 감지하는 ALPINE 기술의 잠재력을 조사하는 추가 연구를 촉발했습니다. ALPINE 기술을 통해 수집된 난소암 세포가 액체 기반 자궁경부 세포학에 비해 세척에서 훨씬 더 높은 민감도로 검출되었다는 사실은 조사관이 세척 표본에서도 EC 검출이 가능해야 한다고 확신하게 합니다. SEIC가 세척 표본에서 이미 검출될 수 있는 것으로 판명되면 II형 EC를 예방할 수도 있습니다.

연구자들은 비정상적인 자궁 출혈 및 의심되는 EC에 대해 "확장 및 소파술" 및 자궁경 검사를 받는 여성의 약 80개의 세척 샘플 및 해당 EC 조직 샘플을 연구할 것입니다. EC 진단을 받고 자궁 적출술이 예정된 여성도 연구에 포함될 수 있습니다. 40건의 확인된 EC 및 상응하는 세척액이 수집될 때까지 환자를 연구에 모집할 것입니다.

비정상 자궁 출혈에 대한 "확장 및 소파술" 및 자궁경 검사 전 또는 EC에 대한 자궁 적출술 전에 자궁강 및 근위 나팔관 세척을 실시합니다. 세척은 전신 마취하에 수술실에서 수행됩니다.

세척이 끝나면 수집 주사기에 캡을 씌우고 주사기를 실험실로 보냅니다. 10ml 자궁 흡인액을 300 x g에서 10분 동안 원심분리합니다. 상청액과 남은 세포 펠릿은 -80°C에서 동결됩니다.

세포 펠릿의 분석은 Kinde 등이 발표한 민감한 대규모 병렬 시퀀싱 방법을 적용하여 수행됩니다. (2). 다음 유전자의 돌연변이가 분석됩니다: AKT1, APC, BRAF, CTNNB1, EGFR, FBXW7, KRAS, NRAS, PTEN, PIK3CA, PPP2R1A 및 TP53.

안전 및 윤리적 문제에 대한 고려 사항:

세척 절차에 대한 한 가지 우려는 EC의 종양 세포가 절차 중에 복강으로 세척될 수 있다는 것입니다.

자궁경 검사 동안 팽창 매체는 튜브를 통해 복막강으로 다량 배출됩니다. 관찰 연구의 메타 분석에서는 진단적 자궁경 검사를 받았거나 받지 않은 EC 여성에서 양성 복막 세포학의 빈도에 유의미한 차이가 없다고 보고했습니다(3).

이것은 진단 자궁경 검사 동안 자궁강에서 복강으로 EC 세포의 수송이 반드시 이식 및 지속성을 초래하지는 않는다는 것을 나타냅니다. 장기 추적 관찰을 보고한 소수의 연구에서 사전 병기 자궁난관조영술(확인된 복강내 누출 포함)(4) 또는 자궁경 검사(5)와 관련된 생존에 대한 손상은 없었습니다.

이러한 발견은 ALPINE 기술에 의한 자궁강 및 근위관 세척이 안전하다는 것을 매우 안심시킵니다.

결론:

자궁강 및 나팔관 세척에서 돌연변이 분석을 통해 매우 높은 민감도와 특이성으로 EC를 검출할 수 있는 경우, 이 결과는 중요한 발견을 나타내며 EC를 조기에 검출할 수 있는 기회를 열어 잠재적으로 다음과 같은 결과를 초래할 수 있습니다. 이전 단계로 단계 이동. 그것은 유형 II EC에서도 예후의 개선으로 이어질 것입니다.

문학:

1. Lax SF 다양한 유형의 자궁 내막 암종에서 분자 유전 경로 : 표현형에서 분자 기반 분류까지. Virchows 아치. 2004;444(3):213.
2. Kinde I et al. 난소암 및 자궁내막암을 검출하기 위한 Papanicolaou 검사의 DNA 평가. Sci Transl Med. 2013년 1월 9일;5(167):167ra4
3. Yazbeck C, Dhainaut C, Batallan A, 외. [진단적 자궁경 검사 및 종양 세포의 복막 전파 위험]. Gynecol Obstet Fertil 2005; 33:247.
4. Devore GR, Schwartz PE, Morris JM. Hysterography: 자궁내막암 환자의 5년 추적 관찰. Obstet Gynecol 1982; 60:369.
5. Ben-Arie A, Tamir S, Dubnik S, 외. 자궁경 검사가 명백한 초기 자궁 내막 암의 예후에 영향을 줍니까? Int J Gynecol Cancer 2008; 18:813.