새로 복원된 단일 임플란트의 단백질체 분석

연구 모집단 이전에 치주 질환 치료를 받고 임플란트 치료를 받은 전신적으로 건강한 비흡연자 총 10명이 2018년 12월부터 2019년 11월 사이에 모집되었습니다. 각 피험자는 기능적 부하(기준선, T0) 후 2~4주에 새로 복원된 나사 유지 임플란트에 기여했으며 12개월 동안 면밀히 추적되었습니다(T1). 모든 연구 임플란트는 플랫폼 전환형이었습니다(ø4.1. Straumann® Bone Level)은 2단계 수술 배치 프로토콜에 따라 설치되었습니다. 같은 턱에 있지만 반대쪽 사분면에 있는 반대편 치아가 대조군 역할을 했습니다. 임상적 평가와 콘빔 컴퓨터 단층촬영 평가를 바탕으로 임플란트 식립을 계획하고 보철 가이드를 사용하여 시행하였다. 임플란트는 물에 잠겼고 6개월 후 Fixture에 Healing Abutment를 조정하고 1개월 후에 Screw 유지 Crown을 조정하여 노출시켰습니다. 제외 기준에는 18세 미만, <18개 치아(제3대구치 제외), 치료되지 않은 치주 질환, III-IV기 치주염, 다른 임플란트 부위의 임플란트 주위염 증거(Berglundh et al, 2018), 상당한 연조직 병리가 포함되었습니다. , 치료되지 않은 우식성 충치(5개 이상), 약물 섭취가 필요한 전신 질환, 수술용 임플란트 식립이 금기인 의학적 상태, 골대사를 방해하는 약물, 임신 또는 수유, 수술 시 치조골 또는 이식된 뼈의 부적절한 크기 연구 3개월 전 현장 및 발치, 흡연.

임상 평가 부위별 및 전입 임상 지표를 T0 및 T1에서 평가했습니다. 수동 칫솔과 변형된 Bass 기술을 사용한 구강 위생 지침은 12개월 연구 기간 동안 4개 시점(T0, 3개월, 6개월 및 T1)에서 반복되었습니다. 치은연상 초음파 괴사조직 제거와 고무 컵을 이용한 연마로 구성된 예방 조치가 동시에 수행되었습니다. 상세하게는 다음과 같은 부위별 임상 지표로 PPD(Probing Pocket Depth), 임상 부착 수준(CAL), 퇴축(REC), 수정 치은 지수(MGI)(점수 범위 0-4)(Lobene et al. 1986), 수정된 치태 지수(mPI)1(점수 범위: 0-3) 및 수정된 고랑 출혈 지수(mBI)1(점수 범위: 0-3)는 PPD와 유사한 방식으로 연구 임플란트의 근심 협측 부위에서 측정되었습니다. , CAL, REC, MGI, 플라크 지수(PI)2(점수 범위: 0-3) 및 대조 치아 부위의 고랑 출혈 지수(SBI)3(점수 범위: 0-5). 각질화된 조직(KTW)의 폭은 테스트 임플란트/대조 치아의 협측 중앙 부분에서 결정되었습니다. 더욱이, 전입 기준으로 PPD, CAL, 이분형 치은연상 치태(PI)(O'Leary et al., 1972) 및 탐침 시 출혈(BOP)(Ainamo et al., 1975)이 1회당 6개 부위에서 기록되었습니다. 입안에 치아/임플란트가 존재합니다. 치주 임상 지수는 수동 치주 프로브(PCP-UNC 15; Hu-Friedy XP-23/QW, Hu-Friedy, Chicago, IL, USA)를 사용하여 가장 가까운 밀리미터까지 결정되었습니다.

방사선 촬영 검사 VixWin™ Platinum Gendex 소프트웨어(Hatfield, PA, USA)는 구강내 디지털에서 T0 및 T1에서 임플란트 고정체의 장축에 평행한 임플란트 플랫폼과 골능(I-BC) 사이의 거리를 선형적으로 평가했습니다. 방사선 사진. 치근단 디지털 방사선 사진(RadioVisioGraphy, Trophy Radiology S.A., Paris, France)은 X선 헤드와 디지털 센서 사이의 10cm 거리에서 긴 원추형 평행 기술을 사용하여 얻었습니다.

열악액 샘플 수집 임플란트 주위 열구액(PICF)은 새로 복원된 연구 임플란트의 중앙-협측 부위에서 수집되었으며, 치은 열창액(GCF)은 T0 반대측 대조 치아의 중앙-협측 부위에서 수집되었습니다. 그리고 T1. PICF/GCF 수집 전에 면봉을 놓고 타액 배출기를 사용하여 표면을 부드럽게 공기 건조시키고 타액으로부터 분리했습니다. 그런 다음, 치은연상 플라크를 멸균 큐렛으로 조심스럽게 제거하고 종이 스트립(Periopaper, OraFlow Inc., Smithtown, NY, USA)을 가벼운 저항이 느껴질 때까지 임플란트 주위/치은열구의 근심측에 부드럽게 배치하고 30분 동안 유지했습니다. 비서. 스트립을 배치할 때 기계적 외상을 방지하기 위해 주의를 기울였으며 혈액으로 오염된 스트립은 폐기되었습니다. 스트립을 추가 처리될 때까지 Eppendorf 튜브(Eppendorf, Hamburg, Germany)에 -80℃에서 보관했습니다.

열구액 샘플의 단백질체학 분석(PICF/GCF) T0 및 T1의 연구 임플란트 부위(n=10) 및 대조 치아 부위(n=10)에서 각각 수집된 PICF 및 GCF 샘플을 모아서 단백질체학 분석에 사용했습니다. . 간단히 말해서, 풀링된 샘플당 20μg의 총 단백질이 PreOmics의 SP3-iST(PreOmics GmbH)를 사용하여 단일 포트, 고체상 강화 샘플 준비(SP3) 보조 단백질 분해를 통해 감소, 알킬화, 트립신화 및 정제되었습니다. 단백질 추출 및 소화를 위한 제조 프로토콜. 이들 추출물을 Speedvac(Thermo Savant SPD121P, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA)을 사용하여 농축하고 추가 사용 시까지 -20°C에서 보관했습니다.

소화된 샘플은 먼저 0.1% 포름산에 용해된 3% 아세토니트릴(ACN) 30μL로 재구성한 다음 단백질체학을 위한 Easy nano-flow HPLC 시스템(Thermo Fisher Scientific)과 인터페이스된 Fusion Orbitrap Lumos 질량 분석기(Thermo Fisher Scientific)에 적용했습니다. 분석. 단백질체학 분석 중에 아세토니트릴과 물의 3개 라이너 구배를 300nL/분 유속으로 0.1% 포름산과 함께 사용했습니다. 구배는 60분에 걸쳐 2%에서 30% 아세토니트릴로 진행된 후 10분 내에 30%에서 97% 아세토니트릴로 진행되었으며 최종적으로 10분 동안 97% 아세토니트릴로 유지되었습니다. 질량 분석기는 Thermo Fisher Scientific의 Xcalibur 소프트웨어 패키지를 사용하여 MS와 MS/MS 사이를 자동으로 전환하는 데이터 종속 방식으로 작동하도록 설정되었습니다. Orbitrap 분석기에는 300-1500m/z의 질량 범위가 선택되었습니다.

획득된 MS 데이터는 Mascot(버전 2.4.1, Matrix Science) 검색 엔진은 인간(2022년 2월 22일 Uniprot에서 액세스) 및 박테리아(eHOMD에서 2022년 2월 22일 액세스) 단백질, 일반적인 MS 오염 물질 및 허위발견율. 단백질체학 분석 동안 전구체 이온 내성과 조각 이온 내성은 각각 10ppm과 ±0.6Da로 설정되었습니다. 트립신 소화를 위해 펩타이드당 최대 2개의 누락된 절단이 허용되었습니다. 시스테인의 카르바미도메틸화 변형은 고정 변형으로 선택되었고, 아스파라긴과 글루타민의 탈아미드화와 메티오닌의 산화는 가변 변형 매개변수로 선택되었습니다.

검색 결과의 스펙트럼 보고서는 Scaffold 소프트웨어(버전 4.2.1, Proteome 소프트웨어)를 사용하여 생성되었으며, FDR이 1%인 단백질, 0.1%의 펩타이드 FDR이 상대적 단백질 존재비 분석에 사용되었으므로 확인된 최소 2개의 고유 펩타이드가 사용되었습니다. 존재비 강도의 배수 변화는 R-소프트웨어(R: A Language and Environment for Statistical Computing, R Development Core Team)를 사용하여 연속 시점 쌍 사이의 log2 배수 변화(FC) 값을 기반으로 계산되었습니다. 두 조건 사이의 고유 스펙트럼 수가 log2FC ≥ 1이거나 한 조건에서만 확인된 단백질은 조절된 것으로 간주되었습니다.

규제 단백질에 대한 생물정보학 분석 규제 단백질은 WebGestalt 온라인 도구를 사용하여 Hallmark 데이터베이스에 대해 ORA(과대표현 분석)를 거쳤습니다. 2022년 3월 25일에 실시된 분석은 T0과 T1 조건 사이에서 치아와 임플란트의 단백질 조절을 비교하는 것을 목표로 했습니다. 마찬가지로, 2022년 3월 29일 분석에서는 T0 또는 T1 조건에서 치아와 임플란트 모두의 단백질 조절을 조사했습니다. 초기하 분포를 사용하여 p-값으로 순위가 매겨진 상위 10개의 강화된 결과가 보고되었습니다. 그러나 p-값이 0.05 미만인 경로만 규제된 것으로 간주되었습니다.