Badanie fizjologiczne w celu określenia aktywności alergicznej skóry po różnym przygotowaniu skóry

INFORMACJE PODSTAWOWE Częstość występowania chorób alergicznych stale wzrasta, osiągając częstość występowania do 30% w krajach uprzemysłowionych. Według Szwajcarskiego Centrum Alergii, Skóry i Astmy oraz Szwajcarskiego Towarzystwa Alergologicznego i Immunologicznego (SSAI), około 2 miliony ludzi cierpi na alergie IgE-zależne. Stwierdzono, że przez podskórne wstrzyknięcia stopniowo zwiększających się dawek alergenu, konwencjonalna podskórna SIT (SCIT) zmniejsza niewłaściwą odpowiedź T-pomocniczą (Th) 2 i wytwarzanie IgE. Ze względu na ryzyko ogólnoustrojowych alergicznych działań niepożądanych, typowy czas trwania terapii 3-5 lat oraz konieczność wykonania 50-80 iniekcji, akceptacja SCIT przez pacjentów jest niska i mniej niż 5% pacjentów z alergią decyduje się na SCIT. Niedawno odkrytą na nowo drogą podania alergenu jest droga naskórkowa w procedurze zwanej immunoterapią naskórkową (EPIT).

Skóra jest atrakcyjną drogą podania immunoterapii, ponieważ jest zarówno łatwo dostępna, jak i odgrywa ważną rolę w układzie immunologicznym składającym się z keratynocytów, komórek Langerhansa (LC), skórnych komórek dendrytycznych (DC). Głównym wyzwaniem w EPIT jest pokonanie fizjologicznej funkcji barierowej skóry. W celu dostarczenia alergenu do immunologicznych komórek efektorowych w skórze, alergen musi zostać przetransportowany przez najbardziej zewnętrzną zrogowaciałą warstwę naskórka, zwaną warstwą rogową naskórka. Warstwa rogowa naskórka ma grubość 10-20 μm i jest nieprzepuszczalna dla cząsteczek większych niż 500 Da. Białka, takie jak alergeny, nie przenikają biernie przez skórę i dlatego potrzebne są strategie udoskonalające, aby umożliwić ten transfer. Postępy w mikrotechnologii mogą przyczynić się do poprawy sytuacji, umożliwiając miniaturyzację mechaniki i konstrukcji. Ponieważ warstwa rogowa naskórka ma grubość zaledwie 10-20 μm, Henry i wsp. zaproponowali, aby do penetracji warstwy rogowej naskórka można było użyć mikroigieł o wielkości od kilkudziesięciu do kilkuset mikronów.

Takie nowe metody pokonywania bariery skórnej stawiają pytanie o wpływ różnego typu uszkodzeń skóry na reaktywność alergiczną skóry. Mianowicie, jak ważna jest rola eksponowanego obszaru (mikroigieł), głębokości urazu (nakłucia skóry) oraz aktywacji keratynocytów. To fizjologiczne pytanie jest przedmiotem niniejszego badania.

PRODUKTY W celu zbadania reakcji fizjologicznych związanych z różnymi stanami skóry i ekspozycją na alergeny wybrano następujące produkty/techniki w celu wywołania różnych stanów skóry w powtarzalny sposób.

Nakłuć lancetem:

Do nakłuwania skóry zostaną użyte sterylne nakłuwacze do badania skóry punktowego 1 mm: nakłuwacz wyprodukowany przez Entaco LTD., Redditch, Worcestershire, Wielka Brytania i dystrybuowany przez Stallergenes®. Wykorzystywane są w codziennej diagnostyce alergii.

Taśma klejąca:

Do przygotowania skóry przy pomocy plastra zostanie użyta konwencjonalna taśma (Tesafilm®).

Układ mikroigieł:

Aby wywołać dużą liczbę mikrokanalików o maksymalnej głębokości 150 μm w warstwie rogówki, zastosowany zostanie stały Microstructured Transdermal System (sMTS) firmy 3M®. Ten system to mały plaster 351 maleńkich igieł, który jest na rynku w USA i jest przeznaczony do przygotowania skóry do przezskórnej aplikacji miejscowych produktów dermatologicznych.

Naskórny roztwór alergenu:

Do podania naskórnego cztery dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenia (10 HEP, 1 HEP, 0,1 HEP i 0,01 HEP/ml) zarejestrowanych wyciągów alergenowych pyłku brzozy (Betula verrucosa) (Soluprick®, ALK-Abelló A/S, Hørsholm, Dania ) będą stosowane jak w codziennej praktyce diagnostycznej alergologii. Histamina jako kontrola pozytywna będzie używana w stężeniu 10 mg/ml, a roztwór zawierający tylko substancje pomocnicze będzie służył jako kontrola negatywna.

Jest to otwarte fizjologiczne badanie reaktywności skóry alergicznej na naskórkową ekspozycję na alergeny u pacjentów z alergią, porównujące różne metody przygotowania skóry. Badanie koncentruje się na przygotowaniu skóry, a nie na konkretnym alergenie lub alergii, ale ze względu na jednorodność jako podstawę do testów wybrano pojedynczą chorobę alergiczną, alergię na pyłki brzozy. W celu oceny efektów różnych technik przygotowania skóry wybrano wewnątrzosobnicze porównanie reaktywności skóry pod kątem natychmiastowej reakcji fazy I na seryjne rozcieńczenia ekstraktów pyłku brzozy. Podejście do rozcieńczeń seryjnych pozwala na ocenę efektu zależnego od dawki i określenie średniego stężenia alergenu dającego podobne reakcje skórne – zatem różnice zostaną wyjaśnione głównie przez różne preparaty skóry, co umożliwi ilościowe porównanie tych technik.

HIPOTEZA Ustalimy, która z trzech różnych technik przygotowania skóry wykorzystuje wyższe stężenie białka w preparacie alergenu (Ch10) wywołując obszar bąbla tej samej wielkości co histamina 10 mg/ml. Zostanie obliczona.

Hipoteza zerowa byłaby zatem:

Ch10 nie różni się istotnie między trzema technikami przygotowania skóry.