Fyziologická studie k určení alergické kožní aktivity po různé přípravě kůže

Dosavadní stav techniky Prevalence alergických onemocnění se neustále zvyšuje a v průmyslových zemích dosahuje prevalence až 30 %. Ve Švýcarsku jsou asi 2 miliony lidí postiženy alergiemi zprostředkovanými IgE, jak uvádí Švýcarské centrum pro alergii, kůži a astma a Švýcarská společnost pro alergologii a imunologii (SSAI). Pomocí subkutánních injekcí postupně se zvyšujících dávek alergenu bylo zjištěno, že konvenční subkutánní SIT (SCIT) snižuje nepřiměřené odpovědi T-helper (Th) 2 a produkci IgE. Vzhledem k riziku systémových alergických vedlejších účinků, typické délce terapie 3–5 let a požadavku na 50–80 injekcí je pacientům akceptace SCIT nízká a méně než 5 % alergických pacientů volí SCIT. Nedávno znovu objevený způsob podávání alergenu je přes epidermis v postupu zvaném epikutánní imunoterapie (EPIT).

Kůže je atraktivní cestou podávání pro imunoterapii, protože je jak snadno dostupná, tak hraje důležitou roli v imunitním systému sestávajícím z keratinocytů, Langerhansových buněk (LC), dermálních dendritických buněk (DC). Hlavní výzvou v EPIT je překonat fyziologickou bariérovou funkci kůže. Aby byl alergen dodán imunologickým efektorovým buňkám v kůži, musí být alergen transportován přes nejvzdálenější keratinizovanou vrstvu epidermis, nazývanou stratum corneum. Stratum corneum je 10-20μm tlusté a nepropustné pro molekuly větší než 500 Da. Proteiny, jako jsou alergeny, neprostupují pasivně kůží, a proto jsou zapotřebí strategie zlepšení, aby se tento přenos umožnil. Pokroky v mikrotechnologii by mohly přispět ke zlepšení situace tím, že umožní miniaturizaci mechaniky a struktur. Vzhledem k tomu, že stratum corneum je pouze 10-20 μm tlusté, Henry et al. navrhli, že k proniknutí do stratum corneum by mohly být použity mikrojehly o velikosti několika desítek až stovek mikronů.

Tyto nové metody překonávání kožní bariéry vyvolávají otázku vlivu různých typů vzorců kožních poranění na alergickou kožní reaktivitu. Konkrétně, jak důležitá je role exponované oblasti (mikrojehly), hloubka poranění (píchání kůže) a aktivace keratinocytů. Tato fyziologická otázka je středem zájmu této studie.

PRODUKTY Aby bylo možné prozkoumat fyziologické reakce týkající se různých stavů kůže a expozice alergenu, byly vybrány následující produkty/techniky za účelem vyvolání různých stavů kůže reprodukovatelným způsobem.

Píchací lanceta:

Pro píchací kůži budou použity sterilní vpichovací lancety pro 1mm bodové kožní testování: vpichovací lanceta, vyráběná Entaco LTD., Redditch, Worcestershire, UK a distribuovaná Stallergenes®. Používají se pro diagnostiku alergií v každodenní rutině.

Lepicí páska:

Pro přípravu strippingu kůže bude použita konvenční páska (Tesafilm®).

Pole mikrojehliček:

Pro indukci velkého počtu mikrokanálů o maximální hloubce 150 μm do vrstvy rohovky bude použit pevný mikrostrukturovaný transdermální systém (sMTS) od 3M®. Tento systém je malá náplast s 351 drobnými jehličkami, která je na trhu v USA a je určena k přípravě pokožky pro transdermální aplikaci topických dermatologických přípravků.

Epikutánní alergenový roztok:

Pro epikutánní podání čtyři desetinásobná sériová ředění (10 HEP, 1 HEP, 0,1 HEP a 0,01 HEP/ml) registrovaných alergenových extraktů z pylu břízy (Betula verrucosa) (Soluprick®, ALK-Abelló A/S, Hørsholm, Dánsko ) bude využívána jako v každodenní diagnostické praxi alergie. Histamin jako pozitivní kontrola bude použit v 10 mg/ml a roztok obsahující pouze pomocné látky bude sloužit jako negativní kontrola.

Jedná se o otevřené fyziologické vyšetření alergické kožní reaktivity na epikutánní expozici alergenu u alergických pacientů srovnávající různé metody přípravy kůže. Zaměření studie je na kožní preparaci a nikoli na konkrétní alergen nebo alergii, ale z důvodu homogenity bylo jako základ pro testování zvoleno jediné alergické onemocnění, alergie na pyl břízy. Aby bylo možné vyhodnotit účinky různých technik přípravy kůže, bylo zvoleno intraindividuální srovnání kožní reaktivity z hlediska reakce okamžité fáze I na sériová ředění extraktů z pylu břízy. Postup sériového ředění umožňuje vyhodnocení účinku v závislosti na dávce a stanovení průměrné koncentrace alergenu, která vede k podobným kožním reakcím – rozdíly budou tedy vysvětleny především odlišnou přípravou kůže umožňující kvantitativní srovnání těchto technik.

HYPOTÉZA Určíme, která ze tří různých technik preparace kůže používá vyšší koncentraci proteinu v alergenovém preparátu (Ch10) vyvolávající vrásku o stejné velikosti jako histamin 10 mg/ml bude vypočtena.

Nulová hypotéza by tedy byla:

Ch10 se významně neliší mezi třemi technikami přípravy kůže.