Farmakokinetyka diaminosrebrowego fluorku

Uczestnicy Sześciu zdrowych ochotników (4 kobiety, średni wiek 36,2 lat, przedział wiekowy 23-52 lata) zostało zrekrutowanych spośród pracowników Universidad Católica de Santa María, Arequipa, Peru. Uczestnicy nie przyjmowali żadnych leków i mieli większość stałych zębów. Uczestników poproszono o unikanie ryb i herbaty przez 12 godzin przed badaniem oraz o nieużywanie fluoryzowanej pasty do zębów 4 godziny przed badaniem. Comité de Etica de Investigacion, Universidad Católica de Santa María zatwierdziła badanie i uzyskano świadomą zgodę.

Badacz DSF [Ag(NH3)2F, CAS RN 33040-28-7, Saforide, Toyo Seiyaku Kasei Co. Ltd. Osaka, Japonia]. DSF jest klarowny i bezbarwny, o słabym zapachu amoniaku. Roztwór 38% zawiera od 24,4 do 28,8% (wag./obj.) srebro (Ag) i 5,0-5,9% fluorek (F). Stężenia Ag i F w DSF użytym do badań wynosiły odpowiednio 24,9% i 5,5%, a ciężar właściwy wynosił 1,253 w 25°C (certyfikat analizy nr 155060). Diaminofluorek srebra jest również określany w literaturze jako diaminofluorek srebra, diaminofluorek srebra lub fluorek srebra.

Procedury Leczono trzy zęby szczęki (kły i przedtrzonowce) w tej samej ćwiartce. Leczono trzy zęby, ponieważ była to średnia liczba zębów nadwrażliwych odnotowana w badaniu epidemiologicznym dorosłych [5]. Zęby były wolne od wypełnień lub ubytków. Powierzchnię twarzy osuszono gazą bawełnianą, a następnie na obszar przyszyjkowy każdego zęba nałożono DSF. Zęby izolowano, aby uniknąć zamoczenia szczoteczki śliną. Każdy ząb został pokryty za pomocą oddzielnej mikroszczoteczki, którą zanurzono w DSF i zważono przed i po aplikacji (Model S2000, Kern & Sohn GmbH, Balingen, Niemcy). Dla każdego uczestnika obliczono sumę różnic w masie zastosowanego materiału.

Pobieranie krwi Bezpośrednio przed podaniem DSF i ponownie po około 30 minutach, 1, 2,3 i 4 godzinach po zastosowaniu, pobrano krew z żyły obwodowej. Przedziały czasowe wybrano na podstawie wcześniejszego badania farmakokinetyki lakieru z fluorem [6]. Krew przenoszono do bezfluorkowej plastikowej probówki Vacutainer z aktywatorem krzepnięcia (BD Vacutainer Plus Plastic Serum Tube, BD Diagnostics, New Jersey). Probówki wirowano przy 1100 g przez 10 minut i surowicę przenoszono za pomocą plastikowej pipety do plastikowych probówek kriogenicznych. Próbki zostały zamrożone i przetransportowane do analizy na University of Washington.

Analiza fluoru. Próbki rozmrażano i analizowano w dwóch lub trzech powtórzeniach metodą dyfuzyjno-detekcji z heksametylodisiloksanem (HMDS) i elektrodą wrażliwą Orion F [7-8]. Aby poprawić wykrywanie, pominięto etap wstępnej dyfuzji [9], a przed zmieszaniem 1 ml surowicy z 1 ml nasyconego 3 M H2SO4 HMDS zakończono uszczelnienia [10]. Roztworem wychwytującym było 20 µmoli 1 M NaOH. Wysuszono ją w celu wyeliminowania zmienności parowania i pozostałości HMDS przed dodaniem 100 ul 3 M kwasu octowego do końcowego pH 3,4. Standardami były 10 i 100 µM fluorku w tym samym końcowym stężeniu NaOH i kwasu octowego, co odpowiadało 1 i 10 µM F w próbkach. Elektrody referencyjne typu ORION F i tulei połączono z miernikiem Accumet Basic 0,1 mV (Thermo Fisher Scientific, Milwaukee WI).

Vacutainers testowano na obecność fluoru, dodając osocze bydlęce do 2 probówek i pozostawiając je na noc przed połączeniem 2 próbek i porównaniem ich z osoczem umieszczonym bezpośrednio w naczyniach dyfuzyjnych. Średnie stężenia (μM±SD) wynosiły 0,34±0,014 i 0,32±0,012, odpowiednio. Dlatego mniej niż 2% F w próbkach surowicy pochodziło z Vacutainerów i wzmacniacza krzepnięcia. Odzysk (średnia ± SD) 1 nmola/ml F dodanego do surowicy bydlęcej wynosił 101 ± 4%. Poziomy fluorków uśredniono i wyrażono jako µM.

Srebro. Próbki rozmrożono i analizowano przy użyciu spektrometrii masowej z plazmą sprzężoną indukcyjnie (EPA 6020a Rev.1 2007). Surowicę (0,5 ml) doprowadzono do 2 ml rozcieńczonym kwasem (stężenie końcowe: 2% HCl, 1% HNO3; śladowe ilości metali, Fisher, Fairlawn, NJ). Próbki wirowano (1290 g) przez 10 minut i filtrowano (0,45 µm, PTFE; cała strzykawka polipropylenowa) do 15 ml polipropylenowych probówek wirówkowych. Próbki analizowano na spektrometrze masowym ze sprzężeniem indukcyjnym (ICPMS) Agilent 7500CE (Santa Clara, CA) z He jako gazem komórki kolizyjnej i autosamplerem ASX-510 (CETAC, Omaha, NB). Zastosowano nebulizator Micromist (Glass Expansion, Pocasset, MA) (gaz nośny 1,15 l/min; bez gazu uzupełniającego). Temperatura komory natryskowej wynosiła 2°C. Moc RF wynosiła 1500 W. Ag oznaczano ilościowo stosując Y jako wzorzec wewnętrzny. Kalibratory rozcieńczano 2% HCl i 1% HNO3 przygotowanymi z handlowych roztworów klasy ICPMS (Ultra Scientific, N. Kingstown, RI; BDH Aristar, VWR, Radnor, PA) i mieściły się w zakresie od 0,5-50 ng/ml. Kalibrację przeprowadzono metodą ważonej (1/cps) regresji liniowej. Dane zostały poprawione metodą ślepą. Wartości srebra mniejsze niż 2 ng/ml przekodowano na 2. Stężenia srebra wyrażono w ng/ml.

Ocena tkanek miękkich Dziąsła przylegające do miejsca aplikacji DSF i błony śluzowe były ogólnie obserwowane na początku leczenia i 24 godziny po zabiegu. Rumień, krwawienie, białe zmiany, owrzodzenia i przebarwienia oceniano metodami opracowanymi na potrzeby wcześniejszego badania [1].