Влияние кровотока на кремниевые подложки

В целях безопасности пациентов исследователи будут измерять следующие лабораторные показатели:

Анализы крови (рутинная безопасность и частота). ОАК/тромбоциты: каждые 1 час, на ГД на следующий день ГАК, включая лактат: каждые 1 час x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, креатинин, Ca, ионизированный Ca, Mg, Phos: начало, конец, на HD далее день Функциональный тест печени: начало, конец, на ГД на следующий день ЛДГ: начало, конец, на ГД на следующий день Прямая проба Кумбса: начало, конец, на ГД на следующий день СОЭ и вчСРБ: начало, конец, на ГД на следующий день КФК: Начало, конец PT/PTT: Начало, конец

Следователи также будут проводить исследовательские анализы крови:

IL-6: Начало, конец, на ГД на следующий день Комплемент: Начало, конец, на ГД на следующий день Гаптоглобин: Начало, конец, на ГД на следующий день Свободный ртуть: Начало, конец, на ГД на следующий день Фибриноген, D-димер: Начало , конец, в HD на следующий день

Кроме того, следователи проведут тестирование материалов после завершения теста каждого участника.

Материальные исследования после испытаний in vivo:

Исследования клеточной и белковой адгезии:

1. Сканирующая электронная микроскопия. SNM помещают в раствор, содержащий 2% глутарового альдегида (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3% сахарозы (Sigma Aldrich) и 0,1 М фосфатно-солевого буфера (PBS) при 4°C и pH 7,4. Через 1 час субстраты дважды промывают PBS в течение 30 минут при 4°C и промывают дистиллированной водой в течение 5 минут. Обезвоживание достигается помещением субстратов в 50% этанол на 15 минут при увеличении концентрации этанола до 60%, 70%, 80%, 90% и, наконец, 100%. Затем обезвоженные образцы помещают на алюминиевые штифты, покрывают напылением из золота и палладия и исследуют с помощью сканирующей электронной микроскопии (СЭМ; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Пибоди, Массачусетс).
2. Иммуногистохимия. Адгезию и активацию тромбоцитов оценивают с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания маркера тромбоцитов CD41 (Abcam, Кембридж, Массачусетс) и маркера сгустка крови, тканевого активатора плазминогена (t-PA, Abcam, Кембридж, Массачусетс). Тромбоциты фиксируют в 4% параформальдегиде (Fisher Scientific, Waltham, MA) в течение 15 минут с последующей инкубацией в 1% бычьем сывороточном альбумине в течение 30 минут для блокирования неспецифического связывания. Тромбоциты дважды метят следующим образом: субстраты сначала инкубируют с первичными антителами (t-PA), разведенными 1:50 в PBS в течение 60 минут, а затем с ослиным антимышиным антителом Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния), разведенным 1: 100 в PBS в течение 60 минут. Наконец, образцы инкубируют с мышиным моноклональным антителом против CD41 человека, меченным флуоресцеинизотиоцианатом, разведенным 1:300 в PBS, в течение 60 минут. Изображения будут получены для каждой реплики с использованием моторизованного инвертированного микроскопа Nikon Eclipse Ti-E (Nikon Instruments Inc., Мелвилл, штат Нью-Йорк), чтобы получить в общей сложности 12 изображений на подложку. Интенсивность флуоресценции изображений количественно определяется с помощью ImageJ.