Efeitos do Fluxo Sanguíneo em Substratos de Silício

Para a segurança do paciente, os investigadores medirão os seguintes laboratórios:

Exames de sangue (segurança e frequência de rotina). Hemograma/plaquetas: q 1 h, na HD no dia seguinte ABGs, incluindo lactato: Q 1 h x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, Creatinina, Ca, Ca ionizado, Mg, Phos: Início, fim, na próxima HD dia Teste de função hepática: Início, fim, em HD no dia seguinte LDH: Início, fim, em HD no dia seguinte Teste direto de Coombs: Início, fim, em HD no dia seguinte ESR e hsCRP: Início, fim, em HD no dia seguinte CPK: Início, fim PT/PTT: Início, fim

Os investigadores também farão testes de sangue de pesquisa:

IL-6: Início, fim, na HD no dia seguinte Complemento: Início, fim, na HD no dia seguinte Haptoglobina: Início, fim, na HD no dia seguinte Free Hg: Início, fim, na HD no dia seguinte Fibrinogênio, D-dímero: Início , fim, em HD no dia seguinte

Além disso, os investigadores farão testes de material após a conclusão do teste de cada participante.

Estudos de materiais após testes in vivo:

Estudos de Adesão de Células e Proteínas:

1. Microscopia Eletrônica de Varredura. O SNM será colocado em uma solução contendo 2% de glutaraldeído (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3% de sacarose (Sigma Aldrich) e 0,1 M de solução salina tamponada com fosfato (PBS) a 4°C e pH 7,4. Após 1 hora, os substratos são enxaguados duas vezes com PBS por 30 minutos a 4°C e lavados com água destilada por 5 minutos. A desidratação é conseguida colocando os substratos em etanol 50% por 15 minutos enquanto aumenta a concentração de etanol para 60%, 70%, 80%, 90% e finalmente 100%. As amostras desidratadas são então montadas em stubs de alumínio, revestidas por pulverização catódica com ouro-paládio e examinadas usando Microscopia Eletrônica de Varredura (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Imuno-histoquímica. A adesão e ativação de plaquetas são avaliadas usando coloração de imunofluorescência para o marcador de plaquetas, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) e marcador de coágulo sanguíneo, ativador de plasminogênio tecidual (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). As plaquetas são fixadas em paraformaldeído a 4% (Fisher Scientific, Waltham, MA) durante 15 minutos seguido de incubação em albumina de soro bovino a 1% durante 30 minutos para bloquear a ligação não específica. As plaquetas são duplamente marcadas da seguinte forma: os substratos foram primeiro incubados com anticorpos primários (t-PA), diluídos 1:50 em PBS por 60 minutos, seguido por anticorpo anti-rato de burro Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA) diluído 1: 100 em PBS por 60 minutos. Finalmente, as amostras são incubadas com anticorpo monoclonal de camundongo marcado com isotiocianato de fluoresceína anti-CD41 humano diluído 1:300 em PBS por 60 minutos. As imagens serão adquiridas por réplica usando um microscópio invertido motorizado Nikon Eclipse Ti-E (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) para obter um total de 12 imagens por substrato. A intensidade fluorescente das imagens é quantificada usando ImageJ.