Blodstrømseffekter på siliciumsubstrater

Af hensyn til patientsikkerheden vil efterforskerne måle følgende laboratorier:

Blodprøver (rutinesikkerhed og hyppighed). CBC/blodplader: q 1 time, ved HD næste dag ABG'er, inklusive laktat: Q 1 time x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, Kreatinin, Ca, ioniseret Ca, Mg, Phos: Start, slut, ved HD næste dag Leverfunktionstest: Start, slut, ved HD næste dag LDH: Start, slut, ved HD næste dag Direct Coombs' test: Start, slut, ved HD næste dag ESR og hsCRP: Start, slut, ved HD næste dag CPK: Start, slut PT/PTT: Start, slut

Efterforskerne vil også lave forskningsblodprøver:

IL-6: Start, slut, ved HD næste dag Komplement: Start, slut, ved HD næste dag Haptoglobin: Start, slut, ved HD næste dag Fri Hg: Start, slut, ved HD næste dag Fibrinogen, D-dimer: Start , slut, på HD næste dag

Derudover vil efterforskerne lave materialetest efter hver deltagers test er afsluttet.

Materialeundersøgelser efter in vivo test:

Celle- og proteinadhæsionsundersøgelser:

1. Scanningselektronmikroskopi. SNM anbringes i en opløsning indeholdende 2% glutaraldehyd (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3% saccharose (Sigma Aldrich) og 0,1 M phosphatbufret saltvand (PBS) ved 4°C og pH 7,4. Efter 1 time skylles substraterne to gange med PBS i 30 minutter ved 4°C og vaskes med destilleret vand i 5 minutter. Dehydrering opnås ved at placere substraterne i 50 % ethanol i 15 minutter, mens koncentrationen af ​​ethanol øges til 60 %, 70 %, 80 %, 90 % og til sidst 100 %. Dehydrerede prøver monteres derefter på aluminiumstumper, sputter-coated med guld-palladium og undersøges ved hjælp af scanningselektronmikroskopi (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunhistokemi. Blodpladeadhæsion og aktivering vurderes ved anvendelse af immunfluorescensfarvning for blodplademarkøren, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) og blodpropmarkør, vævsplasminogenaktivator (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Blodplader fikseres i 4 % paraformaldehyd (Fisher Scientific, Waltham, MA) i 15 minutter efterfulgt af inkubation i 1 % bovint serumalbumin i 30 minutter for at blokere uspecifik binding. Blodplader er dobbeltmærkede som følger: substrater blev først inkuberet med primære antistoffer (t-PA), fortyndet 1:50 i PBS i 60 minutter efterfulgt af Alexa Fluor 546 æsel-anti-muse-antistof (Invitrogen, Carlsbad, CA) fortyndet 1: 100 i PBS i 60 minutter. Til sidst inkuberes prøverne med anti-humant CD41-fluorescein-isothiocyanat-mærket musemonoklonalt antistof fortyndet 1:300 i PBS i 60 minutter. Billeder vil blive erhvervet pr. replikat ved hjælp af et Nikon Eclipse Ti-E motoriseret inverteret mikroskop (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) for at opnå i alt 12 billeder pr. substrat. Den fluorescerende intensitet af billederne kvantificeres ved hjælp af ImageJ.