Effetti del flusso sanguigno su substrati di silicio

Per la sicurezza del paziente, gli investigatori misureranno i seguenti laboratori:

Esami del sangue (sicurezza e frequenza di routine). Emocromo/piastrine: ogni 1 ora, alla HD il giorno successivo Emogasanalisi, compreso il lattato: Q 1 ora x 6 Na, K, Cl, bicarbonato, azotemia, creatinina, Ca, Ca ionizzato, Mg, Phos: inizio, fine, alla HD successiva giorno Test di funzionalità epatica: inizio, fine, alla HD il giorno successivo LDH: inizio, fine, alla HD il giorno successivo Test diretto di Coombs: inizio, fine, alla HD il giorno successivo ESR e hsCRP: inizio, fine, alla HD il giorno successivo CPK: Inizio, fine PT/PTT: Inizio, fine

Gli investigatori eseguiranno anche analisi del sangue di ricerca:

IL-6: inizio, fine, alla HD il giorno successivo Complemento: inizio, fine, alla HD il giorno successivo Aptoglobina: inizio, fine, alla HD il giorno successivo Hg libero: inizio, fine, alla HD il giorno successivo Fibrinogeno, D-dimero: inizio , fine, in HD il giorno successivo

Inoltre, gli investigatori eseguiranno test sui materiali dopo il completamento del test di ciascun partecipante.

Studi sui materiali dopo i test in vivo:

Studi di adesione cellulare e proteica:

1. Microscopia elettronica a scansione. Il SNM sarà posto in una soluzione contenente 2% di glutaraldeide (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3% di saccarosio (Sigma Aldrich) e 0.1 M di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) a 4°C e pH 7.4. Dopo 1 ora, i substrati vengono risciacquati due volte con PBS per 30 minuti a 4°C e lavati con acqua distillata per 5 minuti. La disidratazione si ottiene ponendo i substrati in etanolo al 50% per 15 minuti aumentando la concentrazione di etanolo al 60%, 70%, 80%, 90% e infine al 100%. I campioni disidratati vengono quindi montati su mozziconi di alluminio, sputterizzati con oro-palladio ed esaminati mediante microscopia elettronica a scansione (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunoistochimica. L'adesione e l'attivazione piastrinica vengono valutate utilizzando la colorazione con immunofluorescenza per il marcatore piastrinico, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) e il marcatore del coagulo di sangue, attivatore del plasminogeno tissutale (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Le piastrine vengono fissate in paraformaldeide al 4% (Fisher Scientific, Waltham, MA) per 15 minuti seguite da incubazione in albumina di siero bovino all'1% per 30 minuti per bloccare il legame non specifico. Le piastrine sono doppiamente etichettate come segue: i substrati sono stati prima incubati con anticorpi primari (t-PA), diluiti 1:50 in PBS per 60 minuti, seguiti dall'anticorpo anti-topo Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA) diluito 1: 100 in PBS per 60 minuti. Infine, i campioni vengono incubati con anticorpo monoclonale di topo anti-CD41 umano marcato con isotiocianato di fluoresceina diluito 1:300 in PBS per 60 minuti. Le immagini saranno acquisite per replica utilizzando un microscopio invertito motorizzato Nikon Eclipse Ti-E (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) per ottenere un totale di 12 immagini per substrato. L'intensità fluorescente delle immagini viene quantificata utilizzando ImageJ.