Verenvirtauksen vaikutukset piisubstraatteihin

Potilasturvallisuuden vuoksi tutkijat mittaavat seuraavat laboratoriot:

Verikokeet (rutiiniturvallisuus ja -tiheys). CBC/verihiutaleet: q 1 h, HD seuraavan päivän ABG:t, mukaan lukien laktaatti: Q 1 h x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, kreatiniini, Ca, ionisoitu Ca, Mg, Phos: Alku, loppu, HD seuraava päivä Maksan toimintakoe: Aloitus, loppu, HD seuraavana päivänä LDH: Aloitus, loppu, HD seuraavana päivänä Suora Coombsin testi: Aloitus, loppu, HD seuraavana päivänä ESR ja hsCRP: Aloita, loppu, HD seuraavana päivänä CPK: Aloitus, loppu PT/PTT: Aloitus, loppu

Tutkijat tekevät myös tutkimusverikokeita:

IL-6: Aloitus, loppu, HD seuraavana päivänä Täydennys: Aloitus, loppu, HD seuraavana päivänä Haptoglobiini: Aloitus, loppu, HD seuraavana päivänä Ilmainen Hg: Alku, loppu, HD seuraavana päivänä Fibrinogeeni, D-dimeeri: Aloitus , loppu, HD seuraavana päivänä

Lisäksi tutkijat tekevät materiaalitestauksen jokaisen osallistujan testin jälkeen.

Materiaalitutkimukset in vivo -testauksen jälkeen:

Solu- ja proteiiniadheesiotutkimukset:

1. Pyyhkäisyelektronimikroskooppi. SNM sijoitetaan liuokseen, joka sisältää 2 % glutaraldehydiä (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3 % sakkaroosia (Sigma Aldrich) ja 0,1 M fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) 4 °C:ssa ja pH:ssa 7,4. 1 tunnin kuluttua substraatteja huuhdellaan kahdesti PBS:llä 30 minuuttia 4 °C:ssa ja pestään tislatulla vedellä 5 minuutin ajan. Kuivuminen saadaan aikaan asettamalla substraatit 50-prosenttiseen etanoliin 15 minuutiksi ja samalla nostamalla etanolin pitoisuus 60 %:iin, 70 %:iin, 80 %:iin, 90 %:iin ja lopuksi 100 %:iin. Dehydratoidut näytteet asennetaan sitten alumiinitulleille, sputteroidaan kulta-palladiumilla ja tutkitaan käyttämällä pyyhkäisyelektronimikroskooppia (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunohistokemia. Verihiutaleiden adheesio ja aktivaatio arvioidaan käyttämällä immunofluoresenssivärjäystä verihiutalemarkkerille CD41 (Abcam, Cambridge, MA) ja verihyytymämarkkerille, kudosplasminogeeniaktivaattorille (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Verihiutaleet kiinnitetään 4-prosenttisessa paraformaldehydissä (Fisher Scientific, Waltham, MA) 15 minuutin ajan, minkä jälkeen inkuboidaan 1-prosenttisessa naudan seerumialbumiinissa 30 minuuttia epäspesifisen sitoutumisen estämiseksi. Verihiutaleet kaksoisleimataan seuraavasti: substraatteja inkuboitiin ensin primaaristen vasta-aineiden (t-PA) kanssa, laimennettiin 1:50 PBS:ään 60 minuuttia, minkä jälkeen lisättiin Alexa Fluor 546 aasin anti-hiirivasta-aine (Invitrogen, Carlsbad, CA) laimennettuna 1: 100 g PBS:ssä 60 minuuttia. Lopuksi näytteitä inkuboidaan anti-ihmis-CD41 fluoreseiini-isotiosyanaatilla leimatulla hiiren monoklonaalisella vasta-aineella, joka on laimennettu 1:300 PBS:ään 60 minuuttia. Kuvat hankitaan kopiota kohti käyttämällä Nikon Eclipse Ti-E moottoroitua käänteistä mikroskooppia (Nikon Instruments Inc., Melville, NY), jolloin saadaan yhteensä 12 kuvaa substraattia kohden. Kuvien fluoresenssivoimakkuus määritetään käyttämällä ImageJ:tä.