Bloedstroomeffecten op siliciumsubstraten

Voor de veiligheid van de patiënt zullen de onderzoekers de volgende laboratoria meten:

Bloedonderzoek (routinematige veiligheid en frequentie). CBC/bloedplaatjes: q 1 uur, bij HD volgende dag ABG's, inclusief lactaat: Q 1 uur x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, Creatinine, Ca, geïoniseerd Ca, Mg, Phos: Start, einde, bij HD volgende dag Leverfunctietest: Start, einde, bij HD volgende dag LDH: Start, einde, bij HD volgende dag Directe Coombs' Test: Start, einde, bij HD volgende dag ESR en hsCRP: Start, einde, bij HD volgende dag CPK: Start, einde PT/PTT: Start, einde

De onderzoekers zullen ook bloedonderzoek doen:

IL-6: Start, einde, volgende dag bij HD Complement: Start, einde, volgende dag bij HD Haptoglobine: Start, einde, volgende dag bij HD Gratis Hg: Start, einde, volgende dag bij HD Fibrinogeen, D-dimeer: ​​Start , einde, volgende dag bij HD

Bovendien zullen de onderzoekers materiaaltesten uitvoeren nadat de test van elke deelnemer is voltooid.

Materiaalstudies na in vivo testen:

Onderzoek naar cel- en eiwitadhesie:

1. Scanning elektronenmicroscopie. De SNM wordt geplaatst in een oplossing die 2% glutaaraldehyde (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3% sucrose (Sigma Aldrich) en 0,1 M fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) bevat bij 4°C en pH 7,4. Na 1 uur worden de substraten tweemaal gespoeld met PBS gedurende 30 minuten bij 4°C en gewassen met gedestilleerd water gedurende 5 minuten. Uitdroging wordt bereikt door de substraten gedurende 15 minuten in 50% ethanol te plaatsen terwijl de concentratie van ethanol wordt verhoogd tot 60%, 70%, 80%, 90% en ten slotte 100%. Gedehydrateerde monsters worden vervolgens gemonteerd op aluminium stompjes, sputter-gecoat met goud-palladium, en onderzocht met Scanning Electron Microscopy (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunohistochemie. Hechting en activering van bloedplaatjes worden beoordeeld met behulp van immunofluorescentiekleuring voor de bloedplaatjesmarker, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) en bloedstolselmarker, weefselplasminogeenactivator (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Bloedplaatjes worden gefixeerd in 4% paraformaldehyde (Fisher Scientific, Waltham, MA) gedurende 15 minuten gevolgd door incubatie in 1% runderserumalbumine gedurende 30 minuten om niet-specifieke binding te blokkeren. Bloedplaatjes worden als volgt dubbel gelabeld: substraten werden eerst geïncubeerd met primaire antilichamen (t-PA), 1:50 verdund in PBS gedurende 60 minuten gevolgd door Alexa Fluor 546 donkey anti-muis antilichaam (Invitrogen, Carlsbad, CA) 1 verdund: 100 in PBS gedurende 60 minuten. Ten slotte worden de monsters gedurende 60 minuten geïncubeerd met anti-humaan CD41 fluoresceïne-isothiocyanaat-gelabeld muis monoklonaal antilichaam 1:300 verdund in PBS. Beelden zullen per replicatie worden verkregen met behulp van een Nikon Eclipse Ti-E gemotoriseerde omgekeerde microscoop (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) om in totaal 12 beelden per substraat te verkrijgen. De fluorescentie-intensiteit van de afbeeldingen wordt gekwantificeerd met behulp van ImageJ.