Efectos del flujo sanguíneo en sustratos de silicio

Para la seguridad del paciente, los investigadores medirán los siguientes laboratorios:

Exámenes de sangre (seguridad de rutina y frecuencia). CBC/plaquetas: q 1 h, en HD al día siguiente ABG, incluido lactato: Q 1 h x 6 Na, K, Cl, bicarbonato, BUN, creatinina, Ca, Ca ionizado, Mg, fosfo: inicio, fin, en HD siguiente día Prueba de función hepática: Inicio, final, en HD al día siguiente LDH: Inicio, final, en HD al día siguiente Prueba de Coombs directa: Inicio, final, en HD al día siguiente ESR y hsCRP: Inicio, final, en HD al día siguiente CPK: Inicio, fin PT/PTT: Inicio, fin

Los investigadores también realizarán análisis de sangre de investigación:

IL-6: Inicio, final, en HD al día siguiente Complemento: Inicio, final, en HD al día siguiente Haptoglobina: Inicio, final, en HD al día siguiente Hg libre: Inicio, final, en HD al día siguiente Fibrinógeno, dímero D: Inicio , fin, en HD al día siguiente

Además, los investigadores realizarán pruebas de materiales después de que se complete la prueba de cada participante.

Estudios de materiales después de las pruebas in vivo:

Estudios de Adhesión de Células y Proteínas:

1. Microscopía electrónica de barrido. El SNM se colocará en una solución que contenga glutaraldehído al 2 % (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), sacarosa al 3 % (Sigma Aldrich) y solución salina tamponada con fosfato (PBS) 0,1 M a 4 °C y pH 7,4. Después de 1 hora, los sustratos se enjuagan dos veces con PBS durante 30 minutos a 4°C y se lavan con agua destilada durante 5 minutos. La deshidratación se logra colocando los sustratos en etanol al 50 % durante 15 minutos mientras se aumenta la concentración de etanol al 60 %, 70 %, 80 %, 90 % y finalmente al 100 %. Luego, las muestras deshidratadas se montan en trozos de aluminio, se recubren con oro-paladio y se examinan mediante microscopía electrónica de barrido (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Inmunohistoquímica. La adhesión y activación de las plaquetas se evalúan usando tinción de inmunofluorescencia para el marcador de plaquetas, CD41 (Abcam, Cambridge, MA), y el marcador de coágulos sanguíneos, activador tisular del plasminógeno (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Las plaquetas se fijan en paraformaldehído al 4% (Fisher Scientific, Waltham, MA) durante 15 minutos seguido de incubación en albúmina de suero bovino al 1% durante 30 minutos para bloquear la unión no específica. Las plaquetas se marcan doblemente de la siguiente manera: los sustratos se incubaron primero con anticuerpos primarios (t-PA), se diluyeron 1:50 en PBS durante 60 minutos, seguido de anticuerpo anti-ratón burro Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA) diluido 1: 100 en PBS durante 60 minutos. Finalmente, las muestras se incuban con anticuerpo monoclonal de ratón marcado con isotiocianato de fluoresceína anti-CD41 humano diluido 1:300 en PBS durante 60 minutos. Las imágenes se adquirirán por réplica usando un microscopio invertido motorizado Nikon Eclipse Ti-E (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) para obtener un total de 12 imágenes por sustrato. La intensidad fluorescente de las imágenes se cuantifica utilizando ImageJ.